Interaction entre les cellules résidentes de la paroi vasculaire et les lymphocytes T au cours de l’artérite à cellules géantes

Introduction L’arterite a cellules geantes (ACG) est une vascularite granulomateuse affectant les arteres de gros calibres dont le diagnostic repose sur l’association de signes cliniques et d’une preuve de vascularite apportee par la biopsie d’artere temporale (BAT) et/ou les donnees de l’imagerie. Les cellules musculaires lisses (CML) presentes dans la media jouent un role majeur dans la physiopathologie de cette vascularite. En presence d’interferon-gamma (IFN-γ) produit par les lymphocytes Th1 infiltrant la paroi arterielle, les CML secretent des chimiokines aboutissant au recrutement de lymphocytes T (LT) et de monocytes dans la paroi vasculaire. L’objectif de notre travail etait d’etudier les interactions entre CML, myofibroblastes (MF) et LT au sein des arteres de patients atteints d’ACG. Materiels et methodes Depuis novembre 2017, un fragment des BAT realisees dans notre centre etait envoye au laboratoire le jour meme a l’etat frais. Le phenotype des cellules de la paroi vasculaire etait analyse par microscopie confocale (microscope Leica TCS SP8). Des fragments de BAT negatives ont ete mis en culture ex vivo dans une matrice (MATRIGEL) afin de generer des cellules vasculaires qui ont ete analysees par immunofluorescence, cytometrie en flux et RT-PCR. [1] Leur proliferation a ete evaluee par impedancemetrie (iCELLigence system). Ces cellules vasculaires ont ete traitees ou non par IFN-γ (100 ng/mL) et TNF-α (40 ng/mL) ou interleukine-6 (IL-6) (10 ng/mL) et recepteur soluble de l’IL-6 (IL-6Rs) (100 ng/mL) pendant 72 heures puis cultivees seules ou en presence de cellules mononucleees (PBMC) pendant 7 jours. Les PBMC et les cellules vasculaires ont ensuite ete separees par traitement a l’EDTA et analysees par cytometrie en flux. Le logiciel FlowJo etait utilise l’analyse des donnees de cytometrie en flux. L’expression des ARNm des genes etudies en RT-PCR etait exprimee en unite arbitraire en reference a l’expression du gene GusB. Les resultats etaient exprimes en mediane et P etait le resultat de tests de Wilcoxon. Resultats L’analyse en microscopie confocale des BAT presentant des lesions d’ACG a montre que la neointima hyperplasique etait constituee de MF derivant des CML (d-MF) (α-SMA + Desmin + MHC11lowCD90 + ) dont le phenotype correspondait a celui des cellules obtenues a partir des cultures ex vivo de BAT. A l’inverse des BAT saines, les CML et les d-MF presents dans les BAT atteintes d’ACG, exprimaient HLA-DR, la forme phosphorylee de STAT1 (pSTAT1) et plus moderement pSTAT3, montrant que la voie de signalisation de l’IFN-γ etait activee dans ces cellules. Nous avons reproduit ce type d’activation sur les d-MF cultives in vitro. Lorsque les d–MF etaient prealablement exposes a l’IFN-γ et au TNF-α, leur capacite de proliferation etait diminuee et leur niveau d’expression de HLA-DR et de CD86 augmentait (mediane de fluorescence respectives passant de 57 a 0 [p = 0,03] et de 103 a 34 [p = 0,03]). Exposes a l’IL-6 et l’IL-6Rs, leur capacite de proliferation n’etait pas modifiee et leur niveau d’expression de HLA-DR (MFI = 7,7) et de CD86 (MFI = 67,7) etait significativement plus faible qu’apres traitement par IFN-γ et TNF-α (p = 0,03). La polarisation des LT en Th1 (CD4 + CD8-IFN-γ+) et Tc1 (CD4-CD8 + IFN-γ+) et dans une moindre mesure en Th17 (CD4 + CD8-IL-17 + ) et Tc17 (CD4-CD8 + IL-17 + ) etait augmentee lorsque les PBMC etaient cultivees en presence de d-MF (p ≤ 0,001 et p ≤ 0,05 respectivement). Cet effet sur la polarisation Th1/Tc1 etait augmente lorsque les d-MF avaient prealablement ete exposes a l’IFN-γ et au TNF-α (p = 0,03). Les d-MF exprimaient faiblement le gene IL12p35 a l’etat basal ; son expression augmentait apres exposition a l’IFN-γ et au TNF-α (3,78 vs 32,57, p = 0,03), ce qui est concordant avec l’effet positif des d-MF sur la polarisation Th1. Conclusion Dans les arteres presentant des lesions d’ACG, les cellules constituant la neointima hyperplasique ont un phenotype de d–MF et expriment fortement pSTAT1 ce qui traduit une exposition in vivo a l’IFN-γ. Lorsque ces cellules sont en contact avec des PBMC, elles orientent la polarisation des LT vers la voie Th1/Tc1. Cet effet est encore plus important lorsque les d-MF sont prealablement exposes a un environnement cytokinique de type Th1 (IFN-γ + TNF-α), ce qui n’est pas le cas lorsque ces cellules sont exposees a l’IL-6. Nos resultats suggerent donc que les d-MF jouent un role dans l’amplification de l’inflammation vasculaire de type Th1 au cours de l’ACG.