Approche séroprotéomique de souches de staphylococcus aureus isolées de mammites subcliniques et gangréneuses chez la brebis : détermination du séroprotéome central et accessoire

La bacterie pathogene Staphylococcus aureus est une cause majeure de mammite infectieuse chez les ruminants et provoque d’importantes pertes economiques en production laitiere. Les symptomes observes dans les mammites a S. aureus chez la brebis sont tres variables d’un cas a l’autre. Leur degre de severite s’echelonne de la mammite subclinique (asymptomatique) a la mammite gangreneuse (letale). Les facteurs de virulence staphylococciques et/ou les facteurs d’hote determinant ce degre de severite sont encore tres mal connus. Par ailleurs, les strategies de prevention actuellement en place sont peu efficaces et une meilleure comprehension des interactions hote-pathogene serait d’un grand benefice pour les ameliorer. Objectifs: Identifier et comparer les proteines immunoreactives produites in vivo par deux souches de S. aureus isolees de cas de mammites gangreneuse et subclinique. Determiner les proteines qui sont communes ou qui distinguent ces souches de facon a definir le seroproteome central et accessoire. Methodes: Nous avons utilise l’approche “SERological Proteome Analysis » (SERPA) dans ce contexte. Un groupe de 6 brebis primipares a ete infecte experimentalement par la souche de S. aureus isolee de mammite subclinique (O46) et un second groupe de 6 brebis primipares par la souche isolee de mammite gangreneuse (O11). Les serums ont ete recueillis pendant l’experience pour obtenir les anticorps produits en reponse a l’infection causee par O11 ou O46. En parallele, des conditions de culture in vitro qui miment le contexte de la mammite ont ete determinees et utilisees pour cultiver ces deux souches en vue de preparer des echantillons proteiques (proteines totales, parietales et exoproteines). Apres migration bidimensionnelle et transfert sur membrane, les proteines staphylococciques immunogeniques ont ete revelees a l’aide des serums collectes. Elles ont ensuite ete identifiees par spectrometrie de masse (MALDI-TOF-MS ou LC-MS/MS). Resultats: O11 induit plus de mammites gangreneuses que O46 (p=0,08). Deux pools de serums ont donc ete constitues : un pool resultant des brebis infectees par O11 et un pool O46. Environ 75 proteines immunoreactives ont ete identifiees et la majorite etait des exoproteines (57 %) ou des proteines parietales (37 %). Beaucoup d’entre elles (64 %) ont precedemment ete identifiees comme immunoreactives dans d’autres types d’infection. Ces proteines sont impliquees dans la virulence et la reponse au stress (33 %), dans la machinerie cellulaire (48 %) ou sont de fonction inconnue (19 %). Des proteines reconnues par un seul pool de serums ou presentant un signal plus intense pour un pool donne ont aussi ete identifiees (par exemple, la staphopaine B, l’aureolysine, la glutamyl endopeptidase, identifiees par le pool O11 ; antigene immunodominant A et un analogue a la toxine exfoliative D, identifiees par le pool O46). Conclusions: Le seroproteome central et accessoire a ete determine pour S. aureus en contexte de mammite ovine. L’identification de ces proteines est une etape importante vers une meilleure comprehension des interactions hote-pathogene et, a terme, vers le developpement de strategies prophylactiques, vaccinales ou therapeutiques plus efficaces pour combattre les mammites a S. aureus. Certaines proteines identifiees ici sont specifiquement produites par une des deux souches et pourraient etre associees aux degres de severite observes.