利用优化的显微技术观察和定位Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达

目的优化细胞免疫荧光染色技术结合激光扫描共聚焦显微镜技术的实验步骤，观察并定位Merml／Wbscr22在人肺癌细胞NCI—H1299中的表达，以期对后续深入研究Merml／Wbscr22的分子功能提供技术支持。方法采用Westernblot及细胞免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察Merml／Wbscr22在NCI—H1299细胞的表达与定位，改进并优化免疫荧光染色实验步骤。结果Merml／Wbscr22蛋白在NCI—H1299细胞内过量表达，并定位于细胞核内。细胞免疫染色步骤显著地影响TexasRed一鬼笔环肽的非特异性染色及F—actin、Merml／Wbscr22、细胞核DNA染色荧光的强度。结论结合细胞免疫荧光染色技术与激光扫描共聚焦显微镜技术可以清楚地观察Merml／Wbscr22在人肺癌细胞NCI—H1299的表达与定位，该技术的最优实验步骤是细胞固定、透膜、封闭、TexasRed一鬼笔环肽标记F—actin、一抗结合、二抗结合、DAPI标记细胞核DNA，最后共聚焦显微镜成像，这样既能减少TexasRed一鬼笔环肽的非特异性染色，各组分荧光强度又足够清晰利于观察。