牛胰腺 DNase I基因的合成、表达及功能验证

从NCBI下载牛胰腺DNaseⅠ蛋白序列，利用密码子优化软件(Codon Optimization)进行序列优化，设计并合成24条首尾重叠的引物合成786 bp的 DNase Ⅰ基因，构建重组载体pET30a-DNaseⅠ，转入BL21(DE3)，ArcticExpress(DE3)，BL21(DE3)pLysS 3种感受态中诱导表达后，纯化目的蛋白并验证其活性.结果表明：BL21(DE3)，ArcticExpress(DE3)两种感受态菌落生长异常，且未纯化到目的蛋白，BL21(DE3)pLysS感受态菌落生长正常，但未经诱导和葡萄糖诱导表达的菌液中也未纯化到目的蛋白，IPTG诱导扩大培养的菌液中纯化到0.15 mg/mL的目的蛋白.经验证，酶原液能彻底消化λ-DNA和不同大小的质粒DNA，酶稀释液消化产物电泳检测显示条带拖尾弥散，表明酶稀释液只能消化部分λ-DNA.