Adaptation des mécanismes de résistance par efflux actif chez les souches de pseudomonas aeruginosa dans la mucoviscidose

Bacterie opportuniste bien connue, Pseudomonas aeruginosa est un acteur majeur de l’infection broncho-pulmonaire chronique qui se developpe chez les patients atteints de mucoviscidose (CF). Grâce a des mecanismes complexes, ce pathogene parvient a s’implanter dans les voies respiratoires des malades et a resister aux traitements antibiotiques, meme les plus agressifs. L’analyse retrospective d’une collection de souches du laboratoire de Bacteriologie du CHU de Besancon a revele chez la plupart des porteurs chroniques une diversification parfois extreme des profils de resistance au cours du temps. Les techniques de genotypage par l’analyse des microsatellites (Multiple-Locus Variable-number tandem-repeat Analysis), par la detection de Single Nucleotides Polymorphisms (puces Clondiag®) et par macrorestriction de l’ADN genomique (Pulsed-Field Gel Electrophoresis) ont conduit a des resultats similaires pour la comparaison des isolats sequentiels provenant d’un meme patient. Aucun clone n’etait partage entre les 6 patients, traduisant l’absence de contamination croisee pendant la periode etudiee (1998-2006). Le plus souvent la souche de primo-colonisation evolue pour donner naissance a des sous-populations dont les niveaux de resistance fluctuent. Si certaines d’entres elles evoluent vers la multiresistance, d’autres, au contraire, deviennent hypersensibles a certains antibiotiques. Ainsi, dans pres de 30 % des cas et chez pres de un patient sur deux, les souches deviennent hypersensibles aux β-lactamines. Nous avons montre que ce phenotype particulier, nomme TicHS, analyse chez 11 isolats resulte d’un deficit dans le systeme d’efflux actif MexAB-OprM pouvant impliquer, soit la sous-expression du gene mexB (n=2), soit la production d’une proteine MexB (n=2) ou MexA (n=1) alteree. Chez d’autres isolats (n=6), le systeme MexAB-OprM est a priori intact, mais non fonctionnel. Par ailleurs, dans ce travail nous avons mis en evidence, pour la premiere fois, que P. aeruginosa peut s’adapter in vivo a la pression exercee par les aminosides en modifiant non plus, la quantite de systemes d’efflux produite, mais la pompe elle-meme. Par exemple, la substitution F1018L dans la proteine MexY du systeme MexXY(OprM) entraine une augmentation de la resistance d’un facteur 2 vis-a-vis des substrats de la pompe (aminosides, cefepime, fluoroquinolones). Toutefois, cette substitution n’explique qu’en partie les hauts niveaux de resistance (augmentation des CMI d’un facteur 16) conferes par le systeme MexXY(OprM) chez certaines souches ce qui suggere la presence de mecanismes additionnels susceptibles de moduler l’efficacite de cette pompe.