Estudo preliminar da expressão protéica em Xanthomonas campestris em fontes alternativas de carbono

Introducao . Bacterias do genero Xanthomonas estao associadas a uma variedade de fitopatogenias de importância agricola [ 1 ] ; destacando-se Xanthomonas campestris pv. campestris ( Xcc ), agente causador da podridao negra em especies de cruciferas [1] , e importante produtor da goma xantana, empregada industrialmente como agente espessante e emulsificante [2] . Comercialmente, este polimero e produzido por fermentacao a partir de glicose, que onera sua producao, estimulando assim o interesse por fontes alternativas de carbono [2] , paralelamente a esforcos em compreender sua sintese, visando otimizar as condicoes de producao desta goma. Embora o genoma de Xcc proporcione um perfil genetico para explorar suas caracteristicas biologicas, um grande repertorio de genes e suas proteinas nao foi ainda definido experimentalmente [3] . Objetivo. Sendo de interesse entender a sintese de xantana, este estudo investigou a expressao diferencial de proteinas em Xcc cultivadas em diferentes fontes de carbono. Metodologia. O crescimento de Xcc linhagem 629 foi efetuado a 28oC/250 min -1 /18 h em 50 mL de meio contendo um substrato (biodiesel, glicerina, sacarose, fibra de casca de coco verde), ureia a 0.01% e KH 2 PO 4 a 0.1%. Apos o crescimento, as bacterias foram recuperadas por centrifugacao, lavadas com solucao salina, ressuspensas em 120 µL de tampao (Tris·HCl 0,5 mol·L -1 , glicerol, SDS a 10%, 2-mercaptoetanol) e lisadas a 95oC/5 min. Apos centrifugacao, aliquotas do sobrenadante recuperado contendo as proteinas foram submetidas a SDS-PAGE [4] . Resultados. Xcc 629 nao apenas sintetizou xantana quando cultivada nas diferentes fontes de carbono como a analise eletroforetica do extrato proteico das bacterias apresentou um perfil que indicou a expressao diferencial de proteinas. Embora nao conclusiva, a comparacao dos pesos moleculares (PM) de bandas com dados proteomicos publicados permitiu inferir proteinas expressas por Xcc 629 [ 3 ] . Assim, esta analise permitiu identificar, por exemplo, lipase, esterase e gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase em bacterias cultivadas em biodiesel e glicerina como substratos; enquanto que bandas de proteinas com PM referentes a celulase, xilose isomerase, fosfo-manose isomerase e ?-glicosidase foram inferidas de bacterias cultivadas em fibra de casca de coco verde. Contudo, e necessario otimizar a extracao proteica para eliminar a interferencia da goma residual, pois uma melhor separacao pode permitir a identificacao dessa expressao por LC-MS. Estes dados poderao ser uteis para a producao da goma e para o controle do patogeno.