ALTERAÇÕES CELULARES EM ÁPICES CAULINARES E ESTABILIDADE GENÉTICA DE PLANTAS DE EUCALIPTOS SUBMETIDOS À CRIOPRESERVAÇÃO / CELLULAR ALTERATIONS IN KAOLINITIC APEXES AND GENETIC STABILITY OF EUCALYPTUS PLANTS SUBMITTED TO CRYOPRESERVATION

O eucalipto e amplamente explorado, principalmente para producao de papel e na construcao civil , o que gera uma alta demanda por mudas de eucalipto, tendo-se a necessidade de buscar tecnicas biotecnologicas para aumentar a produtividade e conservar o germoplasma de hibridos elite. Dentre essas tecnicas a criopreservacao apresenta alto potencial para conservacao em longo prazo de genotipos de interesse. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver um protocolo de criopreservacao por meio da tecnica droplet-vitrification para o hibrido comercial Eucalyptus grandis X Eucalyptus urophylla , identificar alteracoes celulares nos apices caulinares cripreservados, e verificar estabilidade genetica das plantas. Apices caulinares foram pre-cultivados em meio MS com sacarose a 0,2 M e 0,5 M, por 24 horas. Posteriormente, os apices foram dispostos em papel aluminio contendo uma gota de PVS2 a 0 oC, antes da imersao em nitrogenio liquido (NL), em  diferentes tempos (20, 40, 60, 80, 100 e 120 minutos). Os apices foram reaquecidos por 10 minutos em solucao de descarregamento a 25oC e transferidos para o meio de regeneracao MS suplementado com 0,14 µM de BAP. Apos 60 dias, avaliaram-se a sobrevivencia, brotacoes e a estabilidade genetica das plantas por citometria de fluxo. Os apices caulinares nos tempos: recem excisados, submetidos a criopreservacao, e apos uma semana de recuperacao foram coletados para analise de histologia e Microscopia Eletronica de Varredura. O tempo de 60 minutos de PVS2 seguido de imersao em nitrogenio liquido proporcionou as maiores taxas de sobrevivencia  (66%), e numero de brotacoes (6 brotos/apice). O conteudo estimado de DNA nuclear das plantas de eucalipto tratadas com PVS2 e criopreservadas nao apresentaram diferencas estatisticas, quando comparado com as plantas do controle. As observacoes histologicas e ultraestruturais revelaram que o protocolo de Droplet-vitrification estabelecido com 60 minutos de exposicao ao PVS2 causou menores danos celulares dos apices caulinares. Alteracoes celulares em apices caulinares e estabilidade genetica de plantas de Eucaliptos submetidos a criopreservacao / Cellular alterations in kaolinitic apexes and genetic stability of Eucalyptus plants submitted to cryopreservation