Fast photochemical reactions of cytochrome P450 at subzero temperatures

Resume En combinant une activation rapide par la lumiere avec une thermostatisation a basses temperatures en milieu hydro-organique fluide, on a pu etudier diverses etapes du cycle reactionnel du cytochrome P 450 . Pour ce faire, un flash a ete adapte sur un spectrophotometre type Aminco-Chance, dont les cuves peuvent etre thermostatees a des temperatures bien inferieures a 0°C. On peut ainsi reduire le cytochrome P 450 ferrique par des photoreducteurs non specifiques tels que le flavine mononucleotide reduit (FMNH 2 ) ou le radical de methyl viologene (MV·). On peut alors former le complexe oxygene Fe 2+ -O 2 soit par addition directe de l'oxygene, soit par photodissociation de Fe 2+ -CO en presence d'oxygene. A basse temperature ce complexe oxygene ne subit plus d'autodecomposition et il ne reagit pas avec les photoreducteurs cites ci-dessus. Enfin une etude systematique de la recombinaison de CO apres photodissociation du complexe Fe 2+ -CO du P 450 microsomal purifie permet de reveler des proprietes specifiques de ce cytochrome par comparaison avec le cytochrome bacterien.