HBx诱导p16（INK4a）高甲基化在Chang细胞株恶性转化倾向中的作用

目的：探讨乙型肝炎病毒X（HBx）蛋白对p16INK4a表达和甲基化的影响,以及其在肝细胞癌早期发生中的作用机制。方法：采用脂质体法将真核表达载体pcDNA3.1B-HBx和pcDNA3.1B质粒分别稳定转染Chang细胞,构建表达HBx的细胞株Chang-HBx和不表达HBx的细胞株Chang-vector;半定量RT-PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白质水平上检测Chang-HBx、Chang-vector和Chang细胞株中的p16INK4a表达;甲基化特异性PCR检测HBx对细胞中p16INK4a启动子甲基化的影响;CCK-8溶剂检测3种细胞株的增殖曲线,流式细胞仪观察3种细胞的细胞周期和细胞凋亡率,重复3次。结果：成功构建了Chang-HBx和Chang-vector稳定细胞株,Chang-HBx细胞生长速度增快,Chang-HBx细胞的S期平均比率明显高于Chang-vector细胞和Chang细胞（28.96%vs.21.53%,P〈0.001;28.96%vs.21.5%,P〈0.001）,而且Chang-HBx细胞的细胞凋亡率平均值明显低于Chang-vector细胞和Chang细胞（2.71%vs.3.69%,P〈0.001;2.71%vs.3.36%,P〈0.001）。初步机制研究证实HBx蛋白介导肝细胞的p16INK4a高甲基化,进而导致p16INK4a在mRNA和蛋白水平上表达均下降。结论：HBx通过诱导p16INK4a高甲基化下调后者的表达水平,可能在Chang细胞的恶性转化倾向中发挥作用。