The effects of protease I of Aspergillus oryzae (brinase) on membrane permeability and growth of landschütz ascites tumour cells

Landschutz ascites tumour cells treated in vitro with Protease I showed no changes in intracellular K and Na levels when the cells were analysed directly at the end of the 60-min incubation period. If, however, the cells were washed twice in the saline medium before analysis significant losses of K, apparently in exchange for Na, were found to take place. Controls incubated in the absence of Protease I and similarly treated showed no such K loss. Viability tests, using lissamine green, indicated that the observed changes were not due to dead cells. These findings are interpreted as being due to an alteration in the plasma membrane associated with increased sensitivity to mechanical trauma, which in turn leads to secondary loss of K. Increases in UV absorbance in the 260 nm region were noted in the supernatant medium of treated cells. Normal mice weighing 30 g tolerated intraperitoneal injections of 0.3 mg Protease I and under, in repeated daily doses, but a single injection of 0.4 (i.e. 13 mg/kg) was lethal within 2 hours. The presence of tumour cells (7.5 mg dry wt) intraperitoneally was found to protect mice against repeated daily injections of this normally lethal dose, indicating that the enzyme is quickly adsorbed onto the tumour cells. No effect on tumour growth in vivo was found when single injections of Protease I were administered intraperitoneally at the same time as the tumour, but when additional doses of the enzyme were given on the two subsequent days, the 7-day yield of tumour cells was significantly increased. Les Effets de la Protease I D'aspergzllus Oryzae (Brinase) Sur la Permeabilite de la Membrane et la Croissance des Cellules de la Tumeur Ascitique de Landschutz Des cellules de tumeur ascitique de Landschutz traitees in vitro avec de la protease I n'ont subi aucune modification quant aux niveaux intracellulaires de K et de Na lorsqu'elles ont ete directement analysees a la fin d'une periode d'incubation de 60 minutes. Toutefois, si les cellules etaient rincees deux fois en milieu salin avant l'analyse, on pouvait observer des pertes importantes de K, apparemment compensees par du Na. Des cellules temoins incubees en l'absence de protease I et traitees de la měme facon n'ont subi aucune perte de K. Les tests de viabilite utilisant le vert de lissamine ont montre que les modifications observees ne sont pas dues aux cellules mortes. Ces constations indiquent qu'il se produit une alteration de la membrane plasmatique associee a une sensibilite accrue a un trauma mecanique, qui a son tour entraǐne une perte secondaire de K. Une augmentation de l'absorption d'ultraviolets dans la zone des 260 nm a ete constatee dans le milieu surnageant des cellules traitees. Des souris normales d'un poids de 30 g ont tolere des injections intraperitoneales de 0.3 mg de protease I au maximum s'il s'agissait de doses quotidiennes, mais une seule injection de 0.4 mg (soit 13 mg/kg) a entraǐne la mort en l'espace de deux heures. La presence de cellules tumorales (7.5 mg, poids sec) dans le peritoine protege les souris contre les injections quotidiennes de cette dose qui normalement est mortelle, ce qui indique que l'enzyme est rapidement adsorbe sur les cellules tumorales. On n'a remarque aucun effet sur la croissance tumorale in vivo lorsque des injections intraperitoneales uniques de protease I ont ete effectuees en měme temps que des injections de cellules tumorales, mais lorsque des doses supplementaires de l'enzyme ont ete administriees les deux jours suivants, le rendement des cellules tumorales a considerablement augmente apres sept jours.