囊胚细胞WGA结合短片段Gap-PCR的α-地贫SEA突变快速植入前遗传学诊断

目的建立一种基于囊胚细胞全基因组扩增（WGA）结合目的序列短片段Gap-PCR基因分型技术的α-地中海贫血东南亚型（SEA）缺失突变快速植入前遗传学诊断新方法。 方法以多重置换扩增（MDA）WGA技术为基础，建立以管家基因GAPDH和β-actin为目的序列的WGA产物双重荧光PCR质检体系，以及突变和正常序列短片段Gap-PCR的α-地中海贫血SEA缺失基因分型体系，通过对不同细胞数SEA携带者淋巴细胞样本的检测进行灵敏度与准确性评价，对12例囊胚活检样本的检测进行应用评价。 结果应用本研究建立的方法，不同淋巴细胞数样本的结果显示3细胞时即未出现等位基因脱扣，4细胞时目标模板的WGA产物量趋于稳定；10例WGA成功的囊胚活检样本的基因分型结果分别为-- SEA /αα（5例）和αα/αα（5例），与验证基因型相符。 结论本研究建立的方法为一个完整检测流程，即以4~6个囊胚活检细胞为检材，对MDA产物进行WGA质检及相对浓度评估后，以短片段Gap-PCR体系而实现α-地贫SEA缺失的PGD快速基因分型；此方法简单快速、结果准确、检测成本低而适合临床常规应用。