Déficience en PATCHED1 : une signature de radiosensibilité chez les patients atteints du syndrome de Gorlin ?

Introduction Le syndrome de Gorlin est une maladie autosomale dominante hereditaire caracterisee par un large panel d’anomalies du developpement et une predisposition aux carcinomes basocellulaires (BCC) ainsi qu’a l’apparition de medulloblastomes dans 5 a 10 % des patients. Dans la majorite des cas, la maladie est causee par des mutations heterozygotes du gene PTCH1  qui est un recepteur transmembranaire de Sonic Hedgehog (SHH) en amont de la voie SHH impliquee dans la regulation du cycle cellulaire, du developpement et la cancerogenese. A ce jour, il n’y a pas de correlation genotype-phenotype chez les patients et pourtant, leur predisposition a developper des BCC est variable et leur sensibilite aux agents genotoxiques est toujours debattue. Materiel et methodes Nous avons caracterise differentes mutations de fibroblastes PTCH1 +/− issus de 7 patients Gorlin par sequencage et analyses cellulaire et moleculaire. Afin de demontrer le lien direct entre l’expression de PATCHED1 et la radiosensibilite, nous avons utilise une approche siRNA pour mettre en evidence un effet de dosage de PTCH1  sur la radiosensibilite dans des cellules normales. La radiosensibilite (rayons γ) a ete definie par des essais de survie cellulaire normalises apres des doses d’irradiation en adequation avec celles pratiquees en clinique. Resultats L’analyse de chaque lignee revele une deficience tres variable en PATCHED1 en correlation avec le type de mutation. Une perte significative d’expression est necessaire pour observer des alterations de la voie SHH, une capacite proliferative diminuee et des modifications du cycle cellulaire. Suite a differentes doses d’irradiation, seules les lignees avec une quasi totale absence de PATCHED1 presentent une radiosensibilite significative. Les premiers resultats montrent que le traitement de fibroblastes non mutes avec un siRNA ciblant PTCH1  provoque une diminution significative de l’ARN et de la proteine, et que cette diminution provoque une augmentation de la radiosensibilite. Discussion Nos resultats montrent qu’une forte deficience en proteine PATCHED1 est necessaire pour conferer une radiosensibilite intrinseque significative aux cellules de patients Gorlin, accompagnee d’alterations des activites du cycle cellulaire et une senescence replicative acceleree. Les resultats obtenus avec des siRNA doivent etre reproduits et seront completes par une approche shRNA et l’utilisation du systeme CRISPR/Cas9. Si le lien direct entre l’expression de PATCHED1 et la radiosensibilite est confirme, les patients devraient etre pris en charge specifiquement en fonction de leur type de mutation et de l’expression de la proteine lors des protocoles d’imageries ou de radiotherapie.