Analyse d’un échantillon en 3 dimensions par une technique de Serial Block Face Imaging amovible

L’analyse tridimensionnelle d’un echantillon trouve ses champs d’application dans l’etude de la micro anatomie et la biologie du developpement Elle peut etre realisee a partir d’echantillons histologiques Le principe methodique est de generer une grande quantite d’images directement a partir de la surface du bloc dans lequel est inclus l’echantillon, et ce, au fur et a mesure qu’il soit sectionne mecaniquement (technique de Serial Block Face Imaging) Les images seriees sont alors deja alignees et permettent de reconstruire en trois dimensions l’echantillon, afin de l’explorer selon n’importe quel plan de coupe virtuel Actuellement, il existe sur le marche differents systemes integres de microscopie episcopique haute resolution ( mais les appareils et leurs consommables sont onereux, la preparation des echantillons est fastidieuse et toxique (fixation en methanol, inclusion en resine coloree JB 4 Polyscience Par rapport aux systemes d'HREM commerciaux, cette technique demande une preparation plus simple et moins onereuse des echantillons. De plus, ce systeme est modulable, peu encombrant et adaptable aussi bien pour des echantillons inclus en paraffine qu'en congele. Cette technique nous a permis de faire une reconstruction simplifiee qui conserve les structures de l'echantillon. Les structures demeurent mieux conservees en paraffine qu'en congele. En congele, nous avons montre la possibilite de travailler avec des marquages fluorescents type GFP.  En perspectives, nous travaillons a automatiser ce systeme (prise d'images et coupe). Il sera egalement necessaire de tester d'autres echantillons (cerveau, oeil…). En ajoutant une deuxieme source laser en excitation (647 nm), cela nous permettrait de visualiser des marquages dans le rouge lointain pour les echantillons congeles, afin de les distinguer de l'autofluorescence du tissus. Enfin, nous travaillons a un systeme pour recuperer les coupes et faire des colorations et immunomarquages sur les zones d'interets.