人抗菌肽FALL-39突变体FALL-39-Lys24’32的构建及其抗菌作用研究

目的:用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体pGEX-1βT-FALL-39-lys24'32,并比较研究FALL-39及其突变肽的功能.方法:采用一步法和两步法PCR定点突变技术,用赖氨酸替代第24位的谷氨酰胺和第32位的天门冬氨酸,构建FALL-39突变体大肠杆菌表达载体;该载体表达的融合蛋白经亲合层析、凝血酶酶切和高效液相后获得高度纯化的FALL-39以及突变肽;用最低有效浓度(MEC)、最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)指标比较纯化产物抗菌作用.结果:PCR定点突变得到突变体质粒pGEX-1βT-FALL-39-lys24'32;重组原核表达质粒pGEX-1βT-FALL-39及其突变体融合蛋白有高效表达,经提取纯化可得到高纯度的活性蛋白FALL-39,和FALL-39-Lys24'32(约4Kd).突变蛋白对大肠杆菌ATCC 25922、耐氨苄青霉素菌ML-35p和绿脓杆菌的抗菌活性明显增强.结论:用PCR定点突变技术成功得到FALL-39基因突变体,大肠杆菌表达载体可得到高效表达的蛋白;突变蛋白的抗菌活性明显增强,提示在FALL-39分子中增加碱性氨基酸可以增强其抗菌活性.