凡纳滨对虾 ( Litopenaeus vannamei ) 微卫星多重 PCR 体系的建立及其在家系亲权鉴定中的应用

为了在遗传分析研究中提高效率并节约成本，本研究从已报道的凡纳滨对虾( Litopenaeus vannamei )微卫星位点中选取多态性较高的位点，基于各位点的扩增片段大小及退火温度等因素进行微卫星位点的组合。通过不断优化位点组合、反应体系及反应程序，成功建立了1个五重、2个四重和1个三重PCR反应体系，并将其应用于11个凡纳滨对虾家系的亲权鉴定。结果显示，四组多重PCR体系中的16个微卫星位点在11个凡纳滨对虾家系中的平均等位基因数( N a )为6，平均多态信息含量(PIC)为0.5813，平均观测杂合度( H o )为0.513，平均期望杂合度( H e )为0.636。利用Cervus3.0软件，对已知系谱关系的11个凡纳滨对虾家系进行亲权分析，其第一亲本累积排除率(CE-1P)、第二亲本累积排除率(CE-2P)和双亲累积排除率(CE-PP)分别为0.99525487、0.99990862和0.99999986。进一步分析表明，当同时使用四组多重PCR体系进行亲权分析时，其模拟配对率和亲权鉴定准确率均为100%，全同胞和半同胞家系鉴别效果良好，表现出准确的鉴别能力。本研究所建立的四组凡纳滨对虾微卫星多重PCR体系均可为后续的凡纳滨对虾遗传多样性分析和亲权鉴定提供高效、准确的检测手段。