牛病毒性腹泻-粘膜病病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立-种牛病毒性腹泻-粘膜病病毒（BVDV）的快速检测方法，根据GenBank中登录的BVDV基因序列，针对5’UTR的保守序列，设计合成了一对特异性引物和一条TaqMan荧光探针。通过对反应条件和反应体系进行优化，建立了一种能快速定量检测BVDV的荧光定量RT—PCR检测方法。通过对20份胎牛血清样品和猪瘟细胞苗半成品进行检测，对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验。结果显示，建立的方法能检测到BVDV，而对CSFV、PRRSV和MDBK细胞的扩增结果均为阴性，具有高度的特异性。在所检测的20份样品中，BVDV阳性6份（30％）。对所构建的标准品进行检测，在10^2-10^8拷贝／μL的范围内可以得到良好的动力学曲线，能检测低至10^3-10^4拷贝／mL的病毒量。表明所建立的检测方法具有快速、特异、灵敏、重复性好等特点，可用于临床及科研中对BVDV的快速定量检测和对牛血清及猪瘟兔化弱毒疫苗等生物制品中是否污染BVDV进行监测。