Minimisation of microbial contamination for potential islet xenografts using specific pathogen-free pigs and a protected environment during tissue preparation

Un imperatif lors de xenotransplantations est d'eviter la transmission d'infections a l'homme. Nous avons compare le risque de contamination bacterienne lors d'isolements d'ilots provenant de 4 porcs eleves et abattus conventionnellement ou de 8 porcs exempts d'organismes pathogenes specifiques (EOPS), et dans des conditions differentes de prelevement du pancreas. Les pancreas, preleves a l'abatoirs pour les porcs « conventionnels et en salle « protegee pour les porcs EDPS, ont ete immerges dans une solution de Betadine, transportes a 4°C dans une solution mUW, et digeres par la collagenase. Le digestata ete centrifuge, le culot resuspendu en mUW et les ilots purifies sur gradient bicouche d'histopaque dans un processeur CDBE 2991. A chaque etape du processus, un aliquot de 10 ml de milieu a ete preleve et sa contamination microbienne analysee. Pour chaque animal, la contamination du foie, qui ne subissait pas de bain de Betadine, a egalement ete examinee. L'analyse des foies de chacun des quatres porcs conventionnels a revele la presence d'une contamination microbienne (1 122 ± 841 CFU/mg) impliquant plusieurs especes de Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus et Enterobacteriaceae. Chez ces memes porcs, le trempage du pancreas dans la Betadine, ainsi que la presence d'antibiotiques dans tous les milieux, diminuaient la contamination pancreatique par rapport a la contamination hepatique, mais etaient insuffisants pour l'eliminer completement puisque l'analyse du milieu de transport du pancreas et la suspension cellulaire issue de la digestion par la collagenase revelait la persistance d'une contamination (respectivement 9,7 ± 2,4 et 10,5 ± 4 CFU/ml). Apres purification des ilots « conventionnels » sur gradient d'Histopaque, aucun milieu ne restait contamine. Au cours de l'analyse des 8 porcs EDPS, aucun des foies preleves ne presentait de contamination. L'analyse des milieux de chacune des etapes de la preparation des ilots EDPS montrait une absence totale de contamination pour 7 des 8 pancreas traites. Seule une contamination par Staphylococcus simulans etait observee, pour un pancreas, dans la solution de transport (6 CFU/ml) et persistait dans le milieu de digestion (16 CFU/ml). Toutes les suspensions purifiees d'ilots et les milieux de culture apres 24 heures etaient parfaitement steriles. En conclusion, les conditions d'elevage des porcs, ainsi que les conditions de prelevement des pancreas, influencent considerablement le risque de contamination microbienne. Les porcs EDPS dont les pancreas sont preleves en ambiance protegee sont une source d'ilots incontournable pour limiter ce risque.