HRE增强hTERT启动子-tk／GCV基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的杀伤作用

目的：探讨缺氧反应元件（HRE）增强hTERT启动子-tk／GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法：构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因表达的重组逆转录病毒载体，在脂质体介导下分别转染PA317包装细胞，G418筛选，直至出现抗性克隆。将重组病毒感染人肺癌细胞SPC—A1和人肝癌细胞Bel-7402，G418筛选出抗性克隆肿瘤细胞。实验分为对照组、SPC—A1／tk组和Bel-7402／tk组。在缺氧处理条件下，MTT法检测前体药物丙氧鸟苷（GCV）对SPC—A1／tk和Bel-7402／tk细胞的杀伤效应，流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果：与对照组比较，缺氧环境培养的SPC—A1／tk和Bel-7402／tk细胞对GCV的敏感性明显增强，其中细胞凋亡率明显升高（P〈0．001），细胞周期各期细胞数有所减少（P〈0．05）。与hTERT启动子引导的tk基因系统组细胞比较，[HRE]hTERT杂合启动子引导的tk基因系统组肿瘤细胞存活率更低（P〈0．01），诱导肿瘤细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），G1期和G0期细胞数有所增高（P〈0．05），S期细胞数减少（P〈0．05）。结论：HRE能增强hTERT启动子-tk／GCV自杀基因系统对缺氧环境中肿瘤细胞的体外杀伤作用。