P150 Stratégie de génotypage pour détecter les recombinaisons non-spécifiques dans le système Cre-Lox: exemples des souches RIP-CRE et aP2-CRE

Introduction L'invalidation conditionnelle in vivo par la strategie Cre-Lox est un outil puissant pour identifier la fonction d'un gene/d'une proteine specifiquement dans un tissu ou un type cellulaire donne. Le choix du promoteur guidant l'expression de la recombinase Cre est fondamental pour determiner la specificite tissulaire de l'invalidation genique. Cependant, le choix d'un promoteur approprie ne permet pas d'empecher les recombinaisons non-specifiques dues au phenomene d'activation non-specifique du gene codant la Cre dans les tissus non cibles. Materiels et methodes Un meme gene d'interet a ete invalide dans 2 types cellulaires differents (cellule beta pancreatique et adipocyte) en croisant une souche de souris floxee pour le gene d'interet avec respectivement une souche transgenique RIP (Rat Insulin Promoter) -Cre (Tg (Ins2-Cre) 23Herr) et une souche transgenique aP2 (adipocyte protein 2) -Cre (aP2-CreSI). Pour detecter une potentielle recombinaison non-specifique, une recherche systematique de l'allele « nul » (allele floxe et recombine par la l'enzyme Cre-recombinase) en plus de l'allele floxe et de l'allele sauvage a ete realisee par PCR sur l'ADN extrait de biopsie caudale et des principaux tissus metaboliques dans les souris issues des deux elevages. Resultats 1) L'utilisation systematique d'une simple PCR permet de detecter les recombinaisons non-specifiques dans le genotypage sur biopsie caudale, et ainsi d'eliminer les souris problematiques de l'elevage. 2) Le taux de recombi-naison non-specifique est dependant de la souche Cre, allant de 5 % (RIP-Cre, la souche est alors utilisable pour generer les souris invalidees pour le gene d'interet) a 100 % (aP2-Cre, rendant la souche inutilisable). 3) L'analyse de l'ADN de differents tissus metabolique (foie, pancreas, tissus adipeux) par la meme procedure de PCR montre que lorsque la recombinaison non-specifique est presente dans l'ADN caudal, elle est retrouvee aussi dans les autres organes analyses. Conclusion Une recherche systematique de recombinaison non-specifique devrait etre mise en œuvre par simple PCR au cours du genotypage dans toutes les souches murines obtenues par ce systeme. Declaration d’interet Les auteurs declarent ne pas avoir d'interet direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme prive, industriel ou commercial en relation avec le sujet presente.