雷公藤多苷片对溃疡性结肠炎大鼠miR-146a、miR-146b及TLR4/MyD88依赖信号通路的调控作用研究

目的研究雷公藤多苷片（TWPT）对2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇溃疡性结肠炎（UC）大鼠微小RNA（mi R-146a、mi R-146b）及TLR4/My D88依赖信号通路的调控作用。方法采用TNBS/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型。将90只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,TWPT低、中、高剂量（30、60、120 mg/kg）组,硫唑嘌呤（AZA,60 mg/kg）组,每组15只。各组分别ig给予相应药物连续14 d。进行各组大鼠结肠组织大体及镜下病理评分。采用q RT-PCR法检测mi R-146a和mi R-146b的表达情况;Western blotting法和RT-PCR法检测大鼠结肠组织中TLR4/My D88依赖信号通路相关分子（TLR4、My D88、TRAF-6、NF-κB、TNF-α、IL-1β）在m RNA及蛋白水平的表达情况。结果 DAI评分,大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWPT对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA。q RT-PCR结果提示：与对照组相比,模型组中mi R-146a和mi R-146b表达明显增加（P〈0.01）;与模型组相比,TWPT及AZA均可显著抑制mi R-146a和mi R-146b的表达（P〈0.01）,其中TWPT中剂量组对2者的抑制作用最强。RT-PCR及Western blotting实验均提示：与对照组相比,模型组中TLR4/My D88依赖信号通路相关的分子无论在m RNA还是蛋白水平表达均显著升高（P〈0.01）;与模型组相比,TWPT呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子m RNA及蛋白水平的表达,其中TWPT高剂量组中各节点分子m RNA及蛋白表达水平低于模型组（P〈0.05）。与AZA组比较,TWPT高剂量组对该信号通路上游因子（TLR4、My D88、TRAF-6、NF-κB）m RNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对末端炎症因子TNF-α及IL-1βm RNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述2种差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,TWPT能通过抑制mi R-146a和mi R-146b的表达,并能抑制TLR4/My D