Immunphänotypisierung von Lymphocyten-Subpopulationen mit monoklonalen Antikörpern im analytischen Durchflußcytometer: Evaluierung von Methodik und Referenzbereichen

Zusammenfassung: Moderne analytische Durchfluscytometer und monoklonale Antikorper gegen Oberflachendeterminanten von Lymphocyten haben die Immunphanotypisierung von Lymphocyten-Subpopulationen vereinfacht und beschleunigt. Wir untersuchten mononukleare Zellen nach Dichtegradientenzentrifugation von EDTA-Vollblut. Die Intraassay-Prazision (n = 12) der Typisierung mit monoklonalen Antikorpern, die gegen T-Zellen (Leu 4), T-Helfer/Inducer-Zellen (Leu 3 a, b), T-Suppressor/cytotoxische Zellen (Leu 2 a) und Zellen mit dem Phanotyp von NK-Zellen (Leu?) gerichtet sind, schwankte zwischen 2,2 und 7,9%. Untersuchungen mit Leu 2 aund Leu 3 a, b-Antikorpern, die entweder mit Fluoresceinisothiocyanat (FITC) oder mit Phycoerythrin (PE) markiert waren, ergaben fur beide Subpopulationen jeweils vergleichbare Ergebnisse. Simultane Doppelmarkierungen mit zwei verschiedenen Antikorpern, die mit kontrastierenden Fluorochromen konjugiert waren, zeigten gegenuber Einzelmarkierungen im Mittel gering hohere relative Anteile der T-Helfer/Inducer-Zellen (Leu 3 a, b-FITC: a = 0,97, b = 3,18, r = 0.98) und der T-Suppressor/ cytotoxischen Zellen (Leu 2a-PE: a = 0,99, b = 2,22, r = 0,97). Eine konstante Beziehung zur Klarung dieser statistisch signifikanten Unterschiede (p ^ 0,0002) fanden wir nicht. Die Untersuchung von 100 nicht kranken Kontrollpersonen ergab fur den Anteil der Subpopulation folgende Referenzbereiche (Median, zentrales 95%-Intervall): T-Zellen 0,75 (0,57-0,87); T-Helfer/Inducer-Zellen 0,47 (0,34-0,63); T-Suppressor/ cytotoxische Zellen 0,26 (0,15-0,42); „NK"-Zellen 0,16 (0,04-0,34). Die absoluten Zellzahlen (10/1) betragen: T-Zellen 1*300 (0,730-2,240); T-Helfer/Inducer-Zellen 0,820 (0,440-1,540); T-Suppressor/cytotoxische Zellen 0,450 (0,190-0,915); „NK"-Zellen 0,300 (0,060-0,670).