Estudo do efeito de Deferoxamina, Curcumina e inibidor de ABL PD180970 sobre o ciclo celular e expressão gênica de linhagens leucêmicas

O câncer e uma doenca que afeta uma grande parte da populacao mundial e possui multiplas causas, sendo diretamente relacionado ao desequilibrio dos genes envolvidos na regulacao do ciclo de vida e diferenciacao das celulas. Neste trabalho avaliamos o efeito de Deferoxamina, Curcumina e inibidor de ABL PD180970 sobre o ciclo celular, viabilidade e expressao dos genes COX2 e CELF2 nas linhagens de celulas K562 e U937. Nossa hipotese inicial foi que a desregulacao do gene CELF2 nas celulas K562 e U937 poderia afetar seu ciclo de vida. Sua expressao antagonica em COX2 quando celulas de tumor pancreatico foram tratadas com Curcumina nos levou a procurar nas bases de dados de microarranjos por outras substâncias que modificariam sua expressao. Para compreender a estrutura genomica da regiao promotora, realizamos analises de genomica comparativa, em uma regiao de aproximadamente 1.000 bases upstream do gene CELF2, que se mostrou conservada em 44 vertebrados, desde primatas nao humanos ao Danio rerio. Esta sequencia foi clonada no vetor pCR-Bicolor, visando futuros ensaios. Por outro lado, foram realizados ensaios de Citometria de Fluxo e q-RT-PCR que nos permitiram observar que o gene CELF2 nao sofre alteracoes na sua expressao quando tratados com as drogas Deferoxamina, Curcumina e inibidor de ABL PD180970, na linhagem celular K562. No entanto, nos ensaios de viabilidade celular; A curcumina causou uma parada do ciclo celular em G2/M apos 24/horas de tratamento, bem como diminuicao da viabilidade de celulas k562 tratadas apos 24/horas nas concentracoes de 12,5/mM e 25/mM. O inibidor de ABL PD180970 somente apresentou diminuicao da viabilidade apos 48/horas de tratamento nas concentracoes 5/mM e 10/mM. O experimento de q-RT-PCR mostrou uma diminuicao estatistica de expressao de COX2 na linhagem celular U937 tratada com DFO e Curcumina. Estes dados de diminuicao da expressao do gene COX-2 sao ineditos para celulas leucemicas tratadas com Curcumina, DFO e inibidor de ABL PD180970 e sao independentes de mudancas na expressao de CELF2. Ao mesmo tempo, nossos dados sugerem que a inducao da expressao de CELF2 pelo tratamento com Curcumina e um fato celula-especifico e nao se aplicaria a linhagens hematopoieticas.