Avaliação da atividade intramacrofágicade hidrazonas derivadas da molécula de isoniazida frente ao Mycobacterium tuberculosis

Introducao:A tuberculose e a doenca infecciosa mais mortal do mundo, causada pelo Mycobacterium tuberculosis. Esse baciloe capaz de infectar e se multiplicar dentro dos macrofagos, podendo assim escapar do sistema imunologico. O tratamento atual contra a TB e longo e consiste na administracao de isoniazida, rifampicina (RIF), pirazinamida e etambutol e pouco se sabe sobre os efeitos desses compostos contra o bacilointramacrofagico. Este cenario mostra a importância da pesquisa de novos farmacos, que diminuam o tempo de tratamento e possuam atividadeintracelular. Assim, neste trabalho avaliamos compostos hidrazonas, numeradas em 14, 16 e 18, que demonstraram atividade contra o M. tuberculosis, com valores de Concentracao Inibitoria Minima (CIM90) frente o bacilo replicante livre (extracelular) de 0,35, 1,82 e 5,30 ?g/mL respectivamente. Objetivo:Avaliar a atividade intramacrofagicadashidrazonas em macrofagos infectados com M.tuberculosis.Metodologia:Foram cultivadas celulas macrofagicas J774A.1 (ATCC TIB-67) e cepa padraode M.tuberculosis H37Rv (ATCC 27294). Foi realizada, em seguida, a infeccao in vitrodos macrofagos e a adicao dos compostos, diluidos em meio RPMI suplementado a 10% com soro fetal bovino. Como farmaco controle foi utilizada a RIF. Apos 72 horas de tratamento, os pocos foram lavados e as celulas lisadas. A solucao final foi diluida seriadamente e plaqueada em meio solido Middlebrook 7H10. Por fim, as placas foram incubadas por 20-30 dias para contagem de unidades formadoras de colonia (UFC) por mL. Resultados e discussao:Previamente, as hidrazonas 14, 16 e 18 foram testadas quanto a sua citotoxicidade e apresentaram valores de Indice de citotoxicidade para 50% do inoculo celular (IC50), apos 72h, de 80, 70 e 10 ?g/mL, respectivamente e, baseando-se nesses valores, buscamos verificar o potencial inibitorio maximo de cada hidrazona frente as bacterias intramacrofagicas. Dessa maneira, ahidrazona 14 foi testada nos valores de 1x, 5x e 10x sua CIM90,inibindo o crescimento do bacilo em 15%, 35% e 65%, respectivamente.Com a possibilidade de aumento dessas concentracoes, considerando o IC50 para as celulas macrofagicas de 80 ?g/mL, avaliamos ainda 20x, 50x e 100x a CIM90 e as inibicoes foram de 70% em todas as concentracoes.Comparando-se a RIF, esta hidrazona apresentou um potencial inibitorio semelhante a este farmaco padrao. A hidrazona 16 foi testada nos valores de concentracao de¼, 1x e 4x sua CIM90, apresentando pouca atividadeintramacrofagica e ahidrazona 18 foi testada no valor de ¼ e 1x CIM90,inibindo20% do crescimento bacteriano no valor de sua CIM90. Conclusao: Todas as hidrazonas demonstraram potencial intramacrofagico, sendo ahidrazona 14 a que apresentoumaior potencial que, somado ao seu valor de IC50, se apresenta como o composto com maior potencial frente ao M. tuberculosis.