瘦素对IL-1β诱导大鼠骨性关节炎软骨细胞MMP-13 mRNA表达的影响

目的：探讨瘦素对IL-1β诱导大鼠骨性关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶-13（MMP-13）mRNA表达的影响及其机制。方法：体外培养大鼠膝关节软骨细胞,取第3代细胞采用免疫细胞化学方法及甲苯胺蓝染色法鉴定Ⅱ型胶原及蛋白多糖表达;MTT法检测不同质量浓度瘦素环境下正常及IL-1β诱导软骨细胞的增殖活力;实时定量PCR法检测不同质量浓度瘦素处理后IL-1β诱导软骨细胞MMP-13 mRNA的表达,ELISA法检测培养基上清肿瘤坏死因子α（TNFα）的水平;通过小RNA干扰（siRNA）抑制瘦素长型受体（OB-Rb）表达,观察瘦素对MMP-13 mRNA表达的影响。结果：所有细胞均能分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖。MTT结果显示,低质量浓度瘦素对细胞增殖无明显影响,瘦素质量浓度大于等于10 ng·ml^-1后可显著促进细胞增殖;而10 ng·ml^-1的IL-1β可显著抑制细胞增殖,同时给予100 ng·ml^-1及1μg·ml-1瘦素则可进一步抑制细胞增殖,差异均有统计学意义（P〈0.05）。实时定量PCR结果显示,IL-1β可增加软骨细胞MMP-13 mRNA表达及TNFα分泌,而加入瘦素（100 ng·ml^-1）后可进一步刺激MMP-13 mRNA的表达及TNFα的分泌,差异具有统计学意义（P〈0.05）。转染OB-Rb siRNA的软骨细胞OB-Rb mRNA的表达显著下降（P〈0.05）,MMP-13 mRNA的表达则不受影响;IL-1β处理对转染组OB-Rb的mRNA表达无明显影响,但可显著诱导MMP-13 mRNA的表达增加（P〈0.05）,进一步加入瘦素后,OB-Rb mRNA的表达有所增加,但表达量远远低于siRNA未处理组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,MMP-13 mRNA的表达则未见增加。结论：一定浓度的瘦素可通过与OB-Rb结合促进IL-1β诱导大鼠骨性关节炎软骨细胞MMP-13 mRNA表达,具有降解软骨作用。