桑树景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因的克隆、原核表达与植物表达载体的构建

景天庚酮糖-1, 7-二磷酸酶(SBPase)是卡尔文循环过程中的关键酶。利用RACE技术得到景天庚酮糖-1, 7-二磷酸酶基因全长cDNA，命名为 MSBPase (GenBank登录号：DQ995346)。 MSBPase 全长为1 527 bp，该序列含有1个1 179 bp的完整开放读码框，编码393个氨基酸，蛋白质理论分子质量约为42.6 ku，等电点为5.85，其氨基酸序列与其他植物中已分离的SBPase有很高的同源性。对 MSBPase 编码的蛋白质(命名为MSBPase)进行结构预测分析表明，该蛋白富含无规卷曲(coil)，高达64.29%，其次是α-螺旋(helix)，为22.19 %，而β-折叠(strand)只有13.52%。将 MSBPase 编码区插入原核表达载体pET30a (+)，并转化到大肠杆菌菌株BL21中，经过IPTG诱导，MSBPase融合蛋白在BL21菌株中成功表达。将得到的 MSBPase 编码区插入植物表达载体pBI121中，构建了 MSBPase 植物表达载体pBI121-SBP。