Etude de l'expression in vivo d'un gene d'arnt#l#e#u de phaseolus vulgaris et utilisation de ce gene dans un systeme de suppression

L'etude des sequences en 5' intervenant dans l'expression des genes des arnt chez les plantes est interessante afin de connaitre la regulation de leur niveau de transcription et ainsi de faciliter leur utilisation dans des applications biotechnologiques. Dans ce but, la comparaison des sequences en 5' des differents genes d'arnt de plantes a ete entreprise afin de mettre en evidence d'eventuelles sequences consensus importantes pour leur expression. Cette etude a revele trois elements presents dans cette region: (1) une richesse en bases a et t, (2) une region d'adn de faible stabilite comprise entre les nucleotides -35 et -30 en amont de la sequence codante et (3) un triplet caa localise au niveau du site d'initiation de transcription. Le role de ces differents elements a ete teste sur la sequence d'un gene d'arnt#l#e#u de phaseolus vulgaris grace a des deletions progressives, des remplacements de la sequence en 5' de ce gene par d'autres sequences d'adn et des mutations ponctuelles dans la region de faible stabilite et au niveau du triplet caa. Cette etude a ete realisee grace a un systeme de suppression comprenant un gene cible (le gene gus, possedant un codon stop premature) et le gene de l'arnt#l#e#u mute en suppresseur ambre. Le niveau d'expression de l'arnt#l#e#u suppresseur est correle a la mesure de l'activite gus restauree par ce systeme, en expression transitoire, dans des protoplastes de tabac. L'analyse de la sequence 5'-flanquante de ce gene a revele que la presence d'une sequence riche en bases a et t et du triplet caa est importante pour son expression. La transactivation d'un gene cible portant un codon stop premature par un arnt suppresseur peut etre utilisee pour l'obtention de semences hybrides presentant des caracteres agronomiques interessants. Un systeme utile sera la transactivation d'un gene codant pour une molecule toxique, sous controle d'un promoteur specifique, pour aboutir a une destruction conditionnelle et controlee de tissus ou d'organes. Dans ce but, la fonctionnalite du systeme de transactivation utilisant l'arnt#l#e#u suppresseur a ete verifiee in planta dans nicotiana tabacum et arabidopsis thaliana. De plus, des genes mutes codant pour une rnase de bacillus amyloliquefaciens, dependant de l'expression du gene de l'arnt#l#e#u suppresseur, ont ete obtenus et testes en expression transitoire, dans des protoplastes de tabac. Le but est d'employer ce systeme pour la creation de plantes de colza apetale, presentant une resistance a un champignon pathogene, le sclerotinia sclerotiorum