Tryptophan Residues of Bacillus Cycloamylose Glucanotransferase: Effect of Modification with N‐Bromosuccini‐mide on the Enzyme‐catalysed Synthesis of Cyclomaltoheptaose from Maltotriose

Cycloamylose glucanotransferase(cyclomalto-oligosaccharide glu-canotransferase, CGTase), obtained from Bacillus stearotheromophilus, was found to catalyze the synthesis of cyclomalto-oligosaccharides from maltotriose (G3) as a substrate. The synthetic reaction is one of the CGTase-catalysed reactions, so called “cyclisation”. A main saccharide produced by the cyclisation reaction under the experimental conditions employed was confirmed to be cyclomaltoheptaose CG7. The kinetic parameters, the Michaelis constant Km and the molar activity k0 were evaluated for the cyclisation reaction. Modification of tryptophan residues with N-bromosuccinimide (NBS) was found to effect on Km, but not on k0 of the cyclisation reaction, suggesting that the tryptophan residue (Trp97) carries an essential role in the binding (disproportionation process) of maltotriose. Tryptophanreste von Bakterien-Cycloamylose-Glucanotransferase: Einflus der Modifizierung mit N-Bromosuccinimid auf die enzymkatalysierte Synthese von Cyclomaltoheptaose aus Maltotriose. Es wurde gefunden, das aus Bacillus stearothermophilus gewonnene Cycloamylose-Glucanotransferase (Cyclomalto-oligosac-charid-glucanotransferase, CGTase) die Synthese von Cyclomalto-oligosacchariden aus Maltotriose (G3) als Substrat katalysiert. Die Synthese-Reaktion ist eine der CGTase-Reaktion, die sogenannte „Cyclisierung”. Ein durch die Cyclisierungsreaktion unter gegebenen experimentellen Bedingungen hauptsachliches Saccharid wurde als Cyclomaltoheptaose (CG7) bestatigt. Die kinetischen Parameter, die Michaelis-Konstante Km und die molare Aktivitat k0 fur die Cyclisierungsreaktion, wurden ermittelt. Es wurde gefunden, das die Tryptophanreste, die mit N-Bromosuccinimid (NBS) modifiziert worden sind, auf den Km, jedoch nicht auf k0 einwirken. Dies weist darauf hin, das der Tryptophanrest (Trp97) eine wesentliche Rolle bei der Bindung (Disproportionierungsprozes) von Maltotriose spielt.