以葡萄糖为唯一碳源合成聚-4-羟基丁酸的重组大肠杆菌的构建

为实现重组大肠杆菌以葡萄糖为唯一碳源合成均聚的P(4HB),PCR扩增大肠杆菌编码谷氨酸:琥珀酰半缩醛转氨基酶基因(gabT),谷氨酸脱羧酶基因(gadA)以及富养罗尔斯通氏菌(Ralstonia eutropha)H16的4-羟基丁酸脱氢酶基因(gadB),并组装到携带富养罗尔斯通氏菌(Ralstonia eutropha)H16的PHA聚合酶基因(phaC)和克氏梭菌(Clostridium kluyveri)中编码4-羟基丁酸:CoA转移酶基因(orfZ)的重组质粒pKESS5.3上,形成一个大的操纵元.携带重组质粒的大肠杆菌获得从三羧酸循环的中间物--α-酮戊二酸到P(4HB)的代谢途径.结果表明,重组大肠杆菌可以以葡萄糖为唯一碳源合成均聚的P(4HB),当向以葡萄糖为唯一碳源的无机培养基添加蛋白胨、酵母提取物、酪蛋白水解物时,P(4HB)的含量可以高达菌体干重的30%.