Prokaryotice expression of the NS1 gene of PPV and renaturation of the recombinant protein

利用PCR技术扩增出PPVNS1基因抗原区.将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-1进行连接并转化,重组质粒经鉴定并测序.测序结果表明,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确,通过试验摸索并确定了表达NS1基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为1.0mmol/L,诱导时间为10h,温度为37℃,其表达量占全菌蛋白的29.8%.表达产物经SDS-PAGE分析,得到分子量约为52kDa的重组蛋白且以包涵体形式存在.重组蛋白经Western blot检测,结果证明重组蛋白可被PPV阳性血清识别.用8mol/L尿素变性溶解包涵体,再用稀释方法和还原型、氧化型谷胱甘肽系统相结合的方法对重组蛋白进行复性.ELISA检测表明,复性后的重组蛋白有良好的生物活性.