hVEGF_（165）及hBMP-7共表达重组腺相关病毒载体体内诱导成骨及成血管研究

目的探讨hVEGF165及hBMP-7共表达重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus,rAAV）体内诱导成骨及成血管的活性,为股骨头缺血性坏死（avascular necrosis of the femoral head,ANFH）的AAV基因治疗提供理论基础。方法取体外培养的第3代兔BMSCs,分别采用以下4种病毒转染并分为4组：rAAV-hVEGF165-内部核糖体进入位点序列（internal ribosome entry site,IRES）-hBMP-7（A组）、rAAV-hVEGF165-绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）（B组）、rAAV-hBMP-7-GFP（C组）及rAAV-IRES-GFP（D组）。取24只雄性新西兰大耳白兔制作后肢缺血模型,并随机分为4组（n=6）,于股骨肌肉内植入上述4组病毒转染的BMSCs,8周后应用超声影像学检测兔后肢胫前动脉血流量,行CD34免疫组织化学染色检测微血管生成。另取24只雄性新西兰大耳白兔制作股骨肌袋模型,并随机分为4组（n=6）,于肌袋内植入上述4组病毒转染的BMSCs,8周后应用X线片检测兔后肢原位骨化,行von Kossa钙盐染色检测肌肉组织成骨矿化。结果病毒注射后动物未出现局部或全身毒性反应。病毒注射后8周,A组兔后肢胫前动脉血流百分比及CD34阳性微血管数均高于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;B组高于C、D组,差异有统计学意义（P〈0.05）;C、D组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。病毒注射后8周,A、C组兔后肢肌袋内出现可被X线检测到的原位骨化,von Kossa肌肉组织钙盐染色可见大量钙盐沉积,且A组原位骨化及钙盐沉积程度均较C组强;B组及D组均未见明显原位骨化及钙盐沉积形成。结论 rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7载体具有体内诱导成骨及成血管的生物学活性。