云南撒坝猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白F（OmpF）缺失株的构建

为了进一步评价E．coliOmpF的功能，我们构建了E．coli外膜蛋白F的缺失突变株。首先根据E．coliF-M-2的测序后的0mpF基因序列设计PCR敲除引物，引物5’端分别有50bp和48bp的拟敲除基因的同源臂，3’端为扩增引物，以pKD3为模板，扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因，然后利用pKD46的λ-Red重组系统替换E．coliF-M-2基因组上的0mpF基因，再利用表达FLP重组酶的质粒pCP20将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除，最后用鉴定引物进行鉴定并测序。结果成功地构建了云南撒坝猪致病性E．coli0mpF缺失突变株。