Detection of hepatitis B virus by fluorescence quantitative PCR

目的建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法(FQ-PCR),并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较. 方法合成扩增HBV DNA 314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针.用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测.同时PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,EB染色,UVP(凝胶成像仪)检出有314bp带者为阳性或弱阳性. 结果建立了检测HBV DNA的荧光定量PCR技术,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在105/ml以上者为阳性,用定量及定性PCR 2种方法检测698例血清标本的结果表明:用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定性PCR观察到193例有阳性特异带,阳性检出率为27.65%.没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者. 结论 FQ-PCR检测HBV DNA较普通定性PCR技术具有操作简便、灵敏度更高,减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点,值得在临床检验中推广应用.