小鼠SRY同源盒基因SOX1的克隆及其真核表达载体pEGFP-C3-SOX1的构建

目的：克隆小鼠SRY同源盒基因SOX1的全长cDNA，构建其携带增强型荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C3-SOX1，为进一步研究SOX1在间充质干细胞神经分化中的作用奠定基础。方法：采用RT-PCR方法从小鼠早期胚胎中扩增带有EcoRⅠ和HindⅢ双酶切位点的SOX1 cDNA片断，与pGEM-T载体连接后转化感受态细菌JM109，然后通过蓝白筛选、酶切技术筛选、鉴定出阳性菌落并进行DNA测序。用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切获得目的片断，再与EcoRⅠ和HindⅢ双酶切过的pEGFP-C3质粒相连接，重组子转化JM109感受态大肠杆菌，酶切方法鉴定阳性菌落。结果：多酶切及DNA测序结果表明提取及纯化的pEGFP-C3-SOX1质粒含有SOX1 cDNA碱基片段，方向及大小正确。结论：从小鼠胚胎中可成功克隆SOX1全长cDNA，并构建其真核表达载体pEGFP-C3-SOX1。