Pretratamiento con hialuronidasa mejora la tinción de colágeno en notocorda de esturión

espanolObjetivo: El presente estudio tiene por objetivo disenar un metodo histologico para determinar la presencia y organizacion de la red de colageno en la notocorda del esturion. Metodos: Secciones seriada de la notocorda de esturion (Acipenser naccarii) fueron utilizadas y se asignaron a dos grupos experimentales diferentes: pretratamiento de hialuronidasa (HP) en una solucion de alcohol acido (HCl al 1% en solucion de alcohol al 70%) durante 15 minutos y posteriormente a una solucion de hialuronidasa en una concentracion de 2 μg / ml (precalentada a 37o C) y grupo de control (CTR), sin tratamiento previo. Luego, la ECM se evaluo mediante dos metodos histoquimicos: tincion Picrosirius Red (PR) durante 30 minutos con rojo Sirio (0,1% de rojo Sirio en una solucion saturada de acido picrico), para la tincion de colageno; y tincion con Alcian Blue (AB) para deteccion de glicosaminoglicanos. Resultados: Las muestras analizadas en este estudio mostraron una reaccion histoquimica positiva para las fibras de colageno en ambos grupos experimentales. Con respecto a la tincion PR, el grupo CTR presento una reaccion mayor y mas homogenea en toda la superficie de las muestras, mientras que el grupo HP presento un patron red de colageno mas definido e intenso. Ademas, esta senal mas intensa en el grupo HP coincidio con un aumento de la birrefringencia en las imagenes de microscopia polarizada de PR. Sin embargo, el grupo HP mostro una senal menos intensa y mas heterogenea cuando se comparo con el grupo CTR en la tincion AB. Conclusion: Utilizando un ejemplo histologico simple, nuestro estudio ilustra la capacidad de un pretratamiento de hialuronidasa para mejorar la tincion de picrosirius en la notocorda del esturion a traves de la luz y la microscopia polarizada. EnglishObjective: The current study aimed to design a histological method to determine the presence and organization of the collagen network in sturgeon notochord. Methods: Serial sections of sturgeon notochord (Acipenser naccarii) were used and assigned to two different experimental groups: Hyaluronidase pre-treatment (HP) in an alcohol acid solution (1% HCl in 70% alcohol solution) for 15 min and hyaluronidase solution in a 2 µg/ ml concentration (pre-heated at 37o C), and control (CTR) group, without pre-treatment. Then, the ECM was assessed by two histochemical methods: Picrosirius Red (PR) staining for 30 min with Sirius red (0.1% of Sirius red in saturated aqueous picric acid), for collagen bundle staining, and Alcian Blue (AB) staining for glycosaminoglycans detection. Results: Samples analyzed in this study showed positive histochemical reaction for collagen fibers in both experimental groups. Referring to PR staining, the CTR group presented a larger and homogeneous reaction was observed in the entire samples, whereas HP group presented a more definite and intense pattern of collagen network. Also, this more intense signal in HP group matched with an increase of birefringence in polarized microscopy images of PR. However, HP group showed a lower intense and more heterogeneous signal when was compared with CTR group in AB staining. Conclusion: Using a simple histological example, our study illustrates the capability of a hyaluronidase pre-treatment to enhance picrosirius red staining in sturgeon notochord trough light and polarized microscopy.