重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性

从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA，利用RT．PCR法获得人角质细胞生长因子．2（hKGF-2）cDNA，并通过PCR方法扩增，再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21（DE3）宿主细胞中获得表达菌株．通过流加补料方式和发酵条件的控制，进行高密度培养，并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物．结果表明：目的蛋白占菌体总蛋白的30．0％以上；经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的rhKGF-2纯度高于99．0％．建立了利用转受体FGFR2—11b的BaF3细胞株进行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法，活性测定结果呈典型的S型曲线，并在一定范围内具有剂量依赖性．