Estudio del complejo ribonucleoprotéico involucrado en la síntesis y mantenimiento del telómero en el parásito Plasmodium falciparum / Study of ribonucleoproteic complex involved in synthesis and maintenance of telomere in Plasmodium falciparum

En celulas eucariotes, por cada division celular se presenta una perdida de ADN telomerico, fenomeno conocido como “el problema de la replicacion final”. En ausencia de mecanismos que compensen la perdida, luego de un numero determinado de divisiones celulares los telomeros alcanzan una longitud critica, lo cual causa: interrupcion en el crecimiento, senescencia y muerte. La solucion al problema es la adicion de secuencias telomericas llevada a cabo por un complejo ribonucleoproteico denominado Telomerasa En presencia de telomerasa, los telomeros se mantienen y la celula puede seguir replicandose indefinidamente. Ya que la actividad telomerasa podria ser el mecanismo que le confiere la capacidad de proliferacion casi ilimitada al Plasmodium falciparum, agente causante de la forma mas severa de malaria humana, el presente trabajo, se enfoco en el analisis de los componentes del complejo y en establecer si la inhibicion de la actividad, afecta la proliferacion celular. El nucleo catalitico del complejo telomerasa: La subunidad proteica (PfTERT) y la subunidad ARN (PfTER) fueron detectados en los estadios de desarrollo intraeritrocitico pero de manera aumentada en el estadio de trofozoito y esquizonte, etapas de desarrollo en las que ocurren multiples rondas de replicacion de ADN. El silenciamiento parcial de los dos genes, ocasiono una significativa disminucion en el crecimiento del parasito, lo que permitio sugerir que ambos genes son esenciales para la proliferacion celular. Ademas, el parasito es susceptible a inhibidores de la actividad telomerasa, pues con solo tres dias de tratamiento con telomestatin, el crecimiento del parasito disminuyo en un 90%. / Abstract. In eukaryotic cells, after each cell division there is a loss of telomeric DNA, phenomenon known as "the end replication problem". In the absence of mechanisms to compensate the loss, after a limited number of cell divisions, the telomere reaches a certain length; the cells begin to age and then die. This sequence loss is usually balanced by the de novo addition of telomere repeats by a ribonucleoprotein called telomerase. In the presence of telomerase, telomeres are elongated and the cell can continue growing indefinitely. Since the telomerase activity could be the mechanism that confers the capacity to limitless proliferation to Plasmodium falciparum, the protozoan parasite responsible for the most severe form of malaria in humans, we studied the telomerase complex and analyzed the effects of telomerase activity inhibitors on parasite proliferation. Protein (PfTERT) and RNA (PfTER) subunits were detected at all stages of the parasite intraerythrocytic development, with higher levels in trophozoite and schizont, stages in which multiple rounds of DNA replication take place. Transient silencing of both genes resulted in a drastic inhibition of parasite growth. These results suggest that telomerase complex is essential for the proliferation of malaria parasite. In addition, we demonstrated that P.falciparum is susceptible to telomerase inhibitors. Treatment of parasites with telomestatin considerably reduced the total parasitemia in comparison to control cultures.