线性聚乙烯亚胺(LPEI)介导DNA转染的优化研究

线性聚乙烯亚胺（LPEI）是一类广泛用于核酸转染或药物传递的阳离子聚合物.为了进一步探究25 kDa LPEI的转染条件，通过凝胶电泳阻滞试验评估N/P，聚合pH及聚合时间对LPEI-DNA复合物形成的影响，继而利用大范围N/P的25 kDa LPEI对HEK293 T细胞进行绿色荧光蛋白表达质粒转染，转染48 h后通过绿色荧光细胞比例及MTT的统计分析，评估转染效率与LPEI造成的细胞毒性.结果表明，N/P的上升能增强LPEI-DNA的电泳阻滞；随着共孵育pH值从6~8升高，LPEI-DNA聚合逐渐减弱；随着共孵育时间延长，LPEI-DNA聚合逐渐增强，孵育1 h时达到饱和.随着体外转染HEK293 T细胞的N/P升高，转染阳性细胞比例逐渐升高，当N/P达到40~60时转染效率达到最高，进一步提高N/P后转染效率极显著下降（p < 0.01）；随着N/P升高，细胞活力逐渐下降.结果表明，N/P，pH，聚合时间均可影响LPEI聚合核酸能力；综合考虑N/P对HEK293 T细胞转染效率及细胞毒性的影响，确定25 kDa LPEI转染细胞适宜的条件为N/P为40~60，聚合pH值为6.0，聚合时间为1 h.