HPLC法测定小鼠血清中的4-甲基-3-硝基苯甲酸及药动学研究

目的：建立4-甲基-3-硝基苯甲酸（4-methyl-3-nitro-benzoic acid,MNBA）的HPLC测定方法,进行药动学研究。方法：用乙腈直接沉淀蛋白提取样品;采用Intertex C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,以磷酸溶液（p H 0.3）-乙腈（50∶50）为流动相,流速1.0 m L·min^-1,检测波长230 nm;25℃条件下对流动相、血清样品预处理方法进行筛选,并对该方法进行方法学验证。结果：待测物质分离度良好,质量浓度在测定范围内与峰面积线性关系良好（r^2≥0.999 9）,方法精密（日内、日间精密度均≤5%）且准确（低、中、高3种质量浓度的准确度均在95%～110%之间）,低、中、高3种质量浓度的样品在4℃冰箱保存10 d,-20℃保存20 d及反复冻融3次后均保持稳定无降解。小鼠腹腔注射MNBA后在体内的代谢过程符合开放一房室模型（w=1/c）,其药代动力学参数为：T1/2分别为（17.0±3.2）h、（30.5±2.7）h和（80.7±2.0）h;AUC（0-t）分别为（7 801.8±2 360.7）mg·L^-1·min^-1、（16 589.1±5 383.6）mg·L^-1·min^-1和（56 898.9±12 153.5）mg·L^-1·min^-1。结论：经方法学验证,本法可作为检测MNBA的测定方法;本文测定的腹腔注射MNBA在小鼠体内的药动学过程为MNBA的后续研究提供参考。