Etude du rôle de la protéine Rasa3 dans la survie et la prolifération des cellules hématopoïétiques chez la souris

Rasa3 est un membre de la famille GAP1 des GTPase activating proteins. Cette proteine stimule la fonction GTPase intrinseque des petites proteines G telles que Ras et Rap. Rasa3 presente une haute affinite pour l’Ins(1,3,4,5)P4 et le PtdIns(4,5)P2, et est principalement exprimee dans les cellules du systeme hematopoietique chez la souris.Dans le but d’etudier chez la souris le role physiologique de Rasa3 dans les cellules hematopoietiques, nous avons d’une part genere et analyse des souris transgeniques surexprimant une forme normale (TgN) ou mutee et catalytiquement inactive (TgM) de la proteine Rasa3 dans les lymphocytes B et/ou T. D’autre part, nous avons recu des souris Rasa3+/- exprimant une proteine Rasa3 tronquee et catalytiquement inactive. Comme les souris Rasa3-/- meurent pendant la gestation, des transferts de cellules hematopoietiques souches de foie fœtal d’embryons Rasa3-/- ont ete realises dans des souris SCID. Les souris SCID apres reconstitution developpent le systeme hematopoietique des souris Rasa3-/-.Nous avons decouvert que l’expression de Rasa3 est regule au niveau de l’ARNm et de la proteique apres activation des lymphocytes B par la voie du recepteur aux antigenes (BCR).L’analyse des souris Rasa3 TgN a permis de mettre en evidence une diminution de la survie des lymphocytes B in vitro et une diminution de la reponse immune a un antigene T-independant (TI) in vivo. Les souris TgM presentent un phenotype inverse aux souris TgN.Six a 8 semaines apres reconstitution, les souris SCID Rasa3-/- presentent un phenotype oppose a celui des souris TgN : leurs lymphocytes B ont une meilleure survie in vitro et une meilleure reponse immune a un antigene TI in vivo. On observe egalement chez ces souris SCID Rasa3-/- une augmentation du nombre de lymphocytes B dans certaines sous-populations spleniques.L’observation prolongee des souris SCID Rasa3-/- a mis en evidence une diminution de leur survie. A l’autopsie, 90% d’entre elles developpent une splenomegalie refletant une hematopoiese extra-medullaire. Soixante pourcents d’entre-elles presentent de l’osteosclerose dans de la cavite medullaire du femur, associee a une augmentation du pourcentage de megacaryocytes. D’un point de vue sanguin, les souris SCID Rasa3-/- developpent une thrombocytopenie severe. Des hemorragies et une anemie regenerative ont egalement ete observees. Les causes exactes de la thrombocytopenie doivent encore etre investiguees dans le cadre de ce travail.Enfin, environ 15 % des souris SCID Rasa3-/- ont montre une infiltration massive de la rate et de la moelle osseuse par des cellules progenitrices CD117+, suggerant qu’une fraction d’entre-elles developpent une leucemie myeloide aigue.