Bases moleculares de las neoplasias mieloproliferativas crónicas filadelfia negativas

Las neoplasias mieloproliferativas (NMP) cromosoma Filadelfia negativas clasicas, Policitemia Vera, Trombocitemia Esencial y Mielofibrosis Primaria son trastornos clonales de la celula madre hematopoyetica caracterizados por la proliferacion de una o mas lineas mieloides. El papel que las mutaciones en genes no driver juegan en la biologia y pronostico de estas enfermedades asi como los mecanismos a traves de los cuales diversas variantes geneticas identificadas incrementan el riesgo de padecer NMP no estan bien estudiados. Los objetivos de esta tesis fueron evaluar la utilidad de la secuenciacion de un panel de genes implicados en patologia mieloide en el diagnostico y pronostico de estas entidades, su aportacion en el conocimiento de la biologia de las mismas y el estudio mediante nuevas tecnicas de biologia molecular de variantes que aumentan el riesgo genetico de padecer NMP. Para ello se recogieron datos de 140 pacientes con sospecha o diagnostico de NMP a los que se les habia realizado secuenciacion de un panel de genes relacionado con patologia mieloide, se realizaron estudios duales de actividad de luciferasa para estudiar la actividad transcripcional de STAT5 ademas de estudios de proliferacion para estudiar los efectos de algunas mutaciones detectadas, se realizo secuenciacion de exomas en una familia con trombocitosis familiar y en dos con NMP familiar y se realizaron experimentos 4C-seq para estudiar el plegamiento e interacciones diferenciales del haplotipo 46/1, implicado en el riesgo genetico de padecer NMP. Se observo una asociacion entre presentar mutaciones y padecer alguna patologia mieloide a expensas de mutaciones con utilidad clinica y con la presencia de mutaciones en genes de tirosinas cinasas, modificadores epigeneticos y aquellos implicados en splicing. En NMP se encontro asociacion entre progresion y la presencia de mutaciones por NGS, mutaciones en tirosinas cinasas y sus vias, en genes de modificadores epigeneticos y genes DAT (DNMT3A, ASXL1 y TET2). Los genes asociados fueron ASXL1, CALR y TET2. La presencia de mutaciones clasificadas como con significado clinico tambien se asocio a progresion, asi como el numero de mutaciones, esto ultimo en el analisis multivariante. En el analisis de tiempo a progresion, este fue menor en aquellos pacientes con mutaciones detectadas en genes modificadores epigeneticos, mutaciones DAT y a mayor numero de mutaciones. En cuanto a trombosis, se encontro asociacion entre trombosis y la presencia de mutaciones DAT, TET2 y DNMT3A en la cohorte global. En NMP solo se encontro asociacion de trombosis con la presencia de mutaciones en DNMT3A. Se encontraron 17 mutaciones no canonicas en JAK2, MPL y CALR. Se identifico y caracterizo una doble mutacion en cis S505C y W515R en MPL observandose que la mutacion S505C coopera con la mutacion W515R aumentando la actividad transcripcional de STAT5 y la proliferacion de celulas portadoras. Identificamos una familia con trombocitosis familiar y caracterizamos la mutacion con actividad constitutiva JAK2 R683 como la causal del cuadro. En cuanto al haplotipo 46/1 se identificaron interacciones diferenciales mediante el estudio de la estructura de la cromatina. Dichas interacciones conllevan un cambio de expresion en JAK2, PD-L2 y, de manera mas relevante, PD-L1 en linfocitos. Las conclusiones mas relevantes de esta tesis son: 1) la secuenciacion de genes implicados en patologia mieloide tiene utilidad diagnostica y pronostica en pacientes con neoplasias mieloproliferativas. 2) Las dobles mutaciones de MPL son capaces de modificar la biologia de la enfermedad mientras que a mutacion germinal R683G de JAK2 ocasiona una trombocitosis familiar. 3) El estudio de la estructura tridimensional del genoma nos ha ayudado a identificar la sobreexpresion de PD-L1 como un posible mecanismo a traves del cual el haplotipo 46/1 media su efecto.