Etude de l'interaction médicament/récepteur par spectrométrie de masse : mise en place et validation de nouveaux protocoles de criblage moléculaire

La decouverte de nouveaux medicaments par le criblage biomoleculaire est au centre de la recherche pharmaceutique actuelle. La spectrometrie de masse, en tant que technique d’analyse fiable, reproductible, sensible, specifique, compatible avec de nombreux types d’echantillons et permettant un debit d’analyse consequent, trouve ainsi sa place dans les strategies de recherche et developpement de nouveaux medicaments. Le but de ce travail etait de mettre en place et de valider une strategie originale, impliquant la desorption/ionisation laser assistee par matrice couplee a la spectrometrie de masse (MALDI-MS) comme technique de detection, en vue du criblage de la liaison de composes a des cibles moleculaires applicable directement a des extraits de plantes. Le protocole que nous avons developpe s’articule en trois etapes successives qui sont l’incubation des molecules a tester avec la cible moleculaire choisie (la tubuline ou la DHFR), l’elimination des composes non lies et enfin l’analyse par MALDI-TOFMS des composes lies. Notre demarche a fait l’objet d’une demarche de validation et les resultats pouvant etre obtenus ont ete discutes. Le debit pouvant etre evalue a 60 echantillons en 1h50 a 3h30 soit de 18 a 32 echantillons a l’heure. Enfin, une demarche innovante nous a permis de prouver que notre approche pouvait etre utile egalement en criblage secondaire. L’application de notre approche a des extraits bruts de plantes (Colchique d’Automne, Pervenche de Madagascar et The vert) a permis de mettre en evidence 20 molecules actives se liant a l’une ou l’autre des cibles moleculaires utilisees et d’evaluer l’affinite relative de l’une d’entre elles