含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白的表达及其生物活性

目的获得含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽的白细胞介素（IL）-24突变体（RGD—IL-24）蛋白，研究其生物活性。方法用重叠聚合酶链反应（PCR）技术在IL-24cDNA序列中引入甘氨酸密码子GGC，构建RGD—IL-24eDNA，将其克隆入质粒pET28a（＋）获得pET28a／RGD—IL-24。pET28a／RGD—IL-24转化菌株BL21（DE3），采用亲合层析纯化蛋白，透析复性。SDS—PAGE电泳和Western blot鉴定RGD—IL-24蛋白。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测RGD-IL-24刺激外周血单核细胞（PBMC）产生IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α和干扰素（IFN）-γ的能力来测定RGD—IL-24免疫活性。细胞黏附实验检测RGD—IL-24与多种肿瘤细胞结合特性。结果成功获得RGD—IL-24基因，并构建表达质粒pET28a／RGD—IL-24。表达的RGD-IL-24蛋白约占菌体总蛋白的30％，纯化后蛋白纯度超过90％。RGD—IL-24处理的人PBMC培养上清IL-6、TNF-α和IFN-γ浓度（ng／L）分别为（780．5±98．3、2399．1±113．2、2130．1±98．6），显著高于IL-24处理组（551．0±52．1、1982．5±138．2、1762．9±119．8）。黏附实验证实RGD—IL-24能增强与肿瘤A549、HeLa和ACHN细胞靶向结合作用。结论含RGD肽的RGD—IL-24蛋白免疫生物活性及与肿瘤细胞靶向结合能力较IL-24明显增强。