人支气管上皮细胞聚-ADP-核糖水解酶缺陷细胞株的构建及鉴定

目的建立高效、稳定的人支气管上皮细胞（16HBE）的聚-ADP-核糖水解酶（PARG）缺陷细胞株，为研究PARG在环境毒物诱导细胞损伤中的作用及了解聚-ADP-核糖基化反应的功能奠定基础。方法设计并合成能编码特异靶向人PARG基因的短发夹RNA（shRNA）的oligoDNA，将之插入到真核表达载体plko．1-puro中构建重组质粒，鉴定成功后转染至正常的16HBE细胞中，RT—PCR及westernblot检测完成筛选细胞株的PARG基因及蛋白水平的表达，并使用流式细胞仪分析构建成功细胞株的生长周期变化。结果重组质粒测序鉴定正确；RT．PCR及westernblot检测显示最终选定的缺陷细胞株干扰效率达80％以上，效果显著（与正常细胞相比，P〈0．05）；且缺陷细胞株的生长周期未见明显变化（P〉0．05）。结论该研究成功构建了高效、稳定的人支气管上皮细胞的PARG缺陷细胞株，为阐明ADP．核糖基化反应的作用机制及其生物学效应提供了可靠的平台。