Analyse protéomique quantitative par technique iTRAQ de la néphrotoxicité des inhibiteurs de la calcineurine

Introduction Les inhibiteurs de la calcineurine (ICN), ciclosporine A (CsA) et tacrolimus (Tac), sont les piliers du traitement immunosuppresseur pour eviter le rejet d’allogreffe. Cependant, leur grande efficacite s’accompagne d’une nephrotoxicite problematique pour leur utilisation a long terme. Les mecanismes de cette nephrotoxicite restent majoritairement non elucides. Materiels et methodes Le but de ce travail etait d’analyser par technique proteomique differentielle non ciblee iTRAQ, le proteome de cellules tubulaires proximales exposees aux ICN. Des cellules porcines LLC-PK1 ont ete exposees 24 h en presence de CsA, Tac ou VIVIT, un inhibiteur specifique de la voie NFAT. Apres digestion trypsique, le lysat cellulaire des differentes conditions a ete marque par des tags isobariques permettant une quantification relative des proteines apres analyse spectrometrie de masse en tandem. La quantification et l’analyse bio-informatique ont fait l’objet de la mise au point d’un logiciel specifique. Resultats Cent trente et une proteines appartenant aux voies de la synthese et de la maturation proteique, de l’organisation du cytosquelette, du metabolisme ou encore du cycle cellulaire ont ete identifiees. Un tiers des proteines n’est pas modifie par l’exposition aux ICN ou au VIVIT, 15 proteines sont surexprimees ou reprimees de facon identique en presence de CsA, Tac ou VIVIT ; la majorite des proteines est modifiee de facon specifique par la CsA ou le Tac independamment de la voie calcineurine. La CsA semble impacter de facon particuliere la sous-unite α-1 de la Na/K/ATPase, la Polypyrimidine Tract-Binding Protein 1 (PTBP-1), la High Mobility Group Protein B1 (HMGB-1), la cofiline ou la thymosine β-10. Discussion Au-dela de l’inhibition de la voie calcineurine/NFAT, chaque ICN modifie de facon specifique le phenotype des cellules tubulaires proximales. La CsA semble particulierement impacter la dynamique du cytosquelette d’actine par des voies dependantes du calcium mais aussi celles des Rho-GTPases. Conclusion La technologie iTRAQ permet l’analyse sans hypothese a priori de l’effet specifique de chaque ICN sur le proteome des cellules tubulaires et la decouverte de nouvelles voies de signalisation impactees. Cette premiere etape d’analyse est indispensable a la mise au point de nouveaux immunosuppresseurs depourvus d’effets nephrotoxiques.