La phosphoprotéine P du Virus Respiratoire Syncytial recrute la protéine phosphatase-1 cellulaire afin de réguler la phosphorylation de M2-1, facteur viral de transcription, ainsi que son activité

Le virus respiratoire syncytial (VRS) est le principal agent responsable de maladies respiratoires severes (bronchiolites, pneumonies) chez les nouveau-nes. Il pose de serieux problemes egalement chez les personnes âgees et les immunodeprimees. En l’absence de vaccin efficace contre ce virus, le developpement rationnel de traitements antiviraux constitue un enjeu de taille. Le VRS est un virus enveloppe dont le genome est constitue d’un ARN simple brin de polarite negative, codant pour 11 proteines. Le genome est transcrit et replique par le complexe ARN polymerase viral. Ce complexe est compose de la nucleoproteine N, de la polymerase L, de la phosphoproteine P et du facteur de transcription M2-1. P est une proteine tetramerique multifonctionnelle intrinsequement desordonnee jouant un role central au sein du complexe polymerase et interagissant avec N (Tran et al., 2007) (Galloux et al., 2015), L (Sourimant et al., 2015) et M2-1 (Mason et al., 2003). L’etat de phosphorylation de P est regule par les phosphatases cellulaires PP1 et PP2A (Bitko et Barik, 1998 ; Asenjo et al., 2005). M2-1 est une proteine tetramerique assurant la « processivite » de la polymerase au cours de la transcription virale. Elle interagit avec P et les ARNm viraux (Tran et al., 2009 ; Blondot et al., 2012 ; Tanner 2014). Lors d’une infection, M2-1 est majoritairement sous forme dephosphorylee ; elle est phosphorylee si elle est exprimee seule en cellule et dephosphorylee si elle est co-exprimee avec P (Cuesta et al., 2000). L'elimination de la phosphorylation par mutagenese dirigee des residus S58 et S61 de M2-1 altere la transcription virale (Cartee et Wertz, 2001). Toutes ces donnees suggerent que l’etat de phosphorylation de M2-1 influe sur la transcription virale en regulant les interactions avec P et l’ARN. Cependant, le mecanisme moleculaire regulant la phosphorylation de M2-1 reste inconnu. En cartographiant le site de P interagissant avec M2-1, de facon inattendue, nous avons observe qu’une mutation du residu F87 situe en amont du site d’interaction avec M2-1 (region 90-110), empechait la dephosphorylation de M2-1 sans effet sur l’interaction P-M2-1, et avait un effet drastique sur l’activite ARN polymerase. Ce residu s’inscrit dans un motif de type « RVxF », implique dans la capture de la phosphatase-1 (PP1), proteine de la cellule hote, par P. Par GST-pulldown et co-immunoprecipitation, nous avons montre que P interagit directement avec PP1 via ce domaine. De plus, par immunofluorescence et microscopie, nous avons observe que P recrute PP1 dans les corps d’inclusion. Enfin nous montrons que l’emploi d’inhibiteurs specifiques contre PP1 entraine une accumulation de M2-1 phosphorylee et diminue l’efficacite de la replication du VRS. Nous en deduisons ainsi que le complexe P-PP1 regule la dephosphorylation de M2-1 et la transcription du VRS. C'est la premiere etude montrant que la phosphoproteine du VRS recrute une phosphatase cellulaire pour moduler l'etat de phosphorylation d’un de ses partenaires viraux.