EXTRAÇÃO DE POLIFENOLOXIDASES EM COGUMELOS DO GÊNERO PLEUROTUS

As enzimas polifenoloxidases (PFO) sao capazes de oxidar compostos fenolicos na presenca do oxigenio, transformando-os em quinonas coloridas que participam, posteriormente, das reacoes de polimerizacao para dar origem as melanoidinas, caracterizadas pelo aparecimento da coloracao marrom-escura. A maior quantidade dessa substância de interesse para a area de alimentos encontra-se entre as plantas, frutas e hortalicas, fungos e crustaceos. Em todos os casos, a enzima esta associada com a pigmentacao escura do organismo. O interesse na pesquisa de novas formas de sua obtencao esta baseado na sua grande relevância biotecnologica, ja que as enzimas do grupamento polifenoloxidase sao responsaveis pela quebra da lignina e de polimeros complexos como efluentes industriais e hidrocarbonetos do petroleo, alem de ter se mostrado importante na defesa contra patogenos. Sao exemplos de PFO as catecolases e as tirosinases. Para que essa enzima possa ser utilizada, ela precisa ser extraida e em alguns casos purificada. Cogumelos comestiveis sao fungos macroscopicos que apresentam quantidade significativa de tirosinase em sua composicao e devido ao fato da facilidade do seu cultivo, torna-se uma alternativa viavel para estudo. Com base nisso, foram analisadas duas especies do genero Pleurotus, em fase micelial, sendo elas Pleurotus ostreatus e Pleurotus sajor-caju , objetivando realizar um comparativo da atividade enzimatica presente em ambos, alem de detectar a viabilidade para posterior purificacao e aplicacao industrial. Para obtencao do extrato enzimatico, o micelio foi homogeneizado com 20 mL de tampao fosfato de potassio 25 mM, em mesa agitadora, durante 20 minutos. A solucao foi entao filtrada em la de vidro, para a realizacao do ensaio de atividade enzimatica, atraves do metodo espectrofotometrico descrido por Lima et al. (2001), onde mistura-se 1mL da amostra com 2 mL do substrato catecol 15 mM em tampao fosfato de potassio. As leituras foram realizadas em duplicada, a 475 nm, os dados obtidos em transmitância e para o branco utilizou-se a solucao de catecol. A atividade da enzima foi calculada pela inclinacao linear da curva. Uma unidade de atividade de PFO e definida como a quantidade da enzima que ocasiona um aumento na absorvância de 0,001/min/mL. Verificou-se uma atividade de 380 U/mL na fracao micelial do cogumelo Pleurotus sajor-caju, enquanto que para a especie Pleurotus ostreatus obteve-se atividade maxima igual a 1042 U/mL. Tendo em vista tais valores pode-se concluir que o cogumelo Pleurotus ostreatus obteve o resultado mais satisfatorio, sendo viavel sua utilizacao para posterior purificacao e aplicacao na industria biotecnologica.