Aplicación de un método de reacción en cadena de la polimerasa anidada-múltiple para la tipificación de papilomavirus humano

Introduccion: existen numerosas tecnicas tanto comerciales o caseras, para la deteccion de infecciones por papilomavirus humano. Para detectar infecciones multiples se requieren tecnicas robustas con alta sensibilidad y especificidad. Objetivos: implementar un protocolo de reaccion en cadena de la polimerasa anidada-multiple para la deteccion y tipificacion de papilomavirus humano en muestras anogenitales de hombres ecuatorianos. Metodos: Se estudiaron 29 muestras de cepillado de la region anogenital de hombres ecuatorianos, residentes en dos regiones del pais (25 muestras de pene y 4 muestras de la mucosa anal de pacientes con condilomas anales). El protocolo se aplico utilizando cebadores dirigidos a las regiones conservadas de los genes virales E6/E7, para una primera reaccion en cadena de la polimerasa. En la segunda reaccion en cadena de la polimerasa, anidada-multiple, se usaron cebadores especificos agrupados en 3 mezclas de 4 genotipos, lo que permitio la discriminacion de genotipos de alto y bajo riesgo oncogenico, por la talla del producto amplificado. Resultados: se obtuvo el 59 % de muestras positivas (17/29) con predominio de los siguientes genotipos: papilomavirus humano 43 (31 %), 16 (28 %), 6/11 (24 %), 42 (24 %), 58 (14 %) y 52 (10 %). Se observo un mayor porcentaje de muestras con infeccion por un solo genotipo (41 %; 7/17), seguido de infeccion multiple con mas de 3 genotipos (29 %; 5/17), con 2 genotipos (18 %; 3/17) y con 3 genotipos (12 %; 2/17). Conclusiones: el protocolo aplicado es especifico para los genotipos de papilomavirus humano analizados. El uso de cocteles de cebadores con varios genotipos permite la discriminacion de estos, lo cual demuestra que la tecnica aplicada es util para su uso en el diagnostico de 12 genotipos diferentes de papilomavirus humano.