Stratégies analytiques et comparaison chimiométrique de mélanges lipidiques complexes : composition, caractérisation et évolutions physiologiques du film hydrolipidique cutané : Analytical strategies and chemometric comparison of complex lipid mixtures : composition, characterization and physiological evolution of the skin hydrolipidic film

Le film hydrolipidique est « l’ultime frontiere entre l’organisme et l’environnement ». Ainsi, il offre a la peau une bonne protection et contribue largement a ses proprietes. Cependant, il peut etre implique dans plusieurs perturbations cutanees. Le but de ce travail etait d’obtenir un profil global de l’ensemble des lipides cutanes de surface, riche en informations structurales et capable de decrire l’organisation de ces molecules, permettant de suivre l’evolution physiologique du film hydrolipidique au niveau moleculaire. Plusieurs approches analytiques ont ete developpees et des outils statistiques et chimiometriques ont ete utilises pour exploiter les resultats.La caracterisation des lipides cutanes de surface (LCS) a ete realisee en chromatographie en phase gazeuse a haute temperature couplee a la spectrometrie de masse (HT-GC/MS). Le protocole analytique a ete developpe en conservant les structures lipidiques dans leur etat intact. Plus de 200 composes ont ete identifies et repartis en 5 classes : acides gras libres, hydrocarbures, cires, sterols et glycerides. L’acide palmitique (C16:0) et l’acide sapienique (C16:16) sont preponderants et entrent dans la structure de tres nombreux composes. Plusieurs approches quantitatives ont ete mises en place : calcul des descripteurs chromatographiques, normalisation interne pour l’analyse par classe et exploitation chimiometrique des composes consideres individuellement.Trois problematiques ont ete explorees par ces techniques et ont conduit aux resultats suivants :La repartition des LCS sur differentes zones corporelles se traduit par un ratio squalene/cholesterol plus eleve dans les zones riches en glandes sebacees que dans les zones pauvres. Ce descripteur est ainsi un bon critere d’evaluation de la balance secretion sebacee/desquamation. L’evolution des LCS en fonction de la localisation geographique et/ou la couleur de la peau a ete etudiee en cherchant les variations de la composition par HT-GC/MS et de l’organisation par spectroscopie Raman. Une difference de composition a ete mise en evidence entre les volontaires en fonction de la localisation geographique : le compose le plus implique est l’acide sapienique (C16:1Δ6). Une difference de conformation (trans/gauche) au niveau des chaines alkyles a ete detectee.Enfin, l’adaptation de la barriere cutanee apres la naissance a ete deja signalee mais sa traduction au plan moleculaire a pu etre etudiee par le protocole analytique developpe, chez les nourrissons des les premiers jours apres la naissance jusqu’a l’âge de 6 mois. Une diminution de la quantite globale de secretion sebacee a ete observee, avec en parallele, une augmentation selective du cholesterol esterifie par des acides gras d’origine epidermique. Ceci indique un accroissement de la participation relative des lipides epidermiques dans le film hydrolipidique comme resultat d’une diminution de la secretion sebacee.Les approches analytiques developpees dans ce travail de these permettent une caracterisation moleculaire fine des LCS en vue d’etudier…