新磷氮霉素A生产菌Streptomyces auratus AGR0001的遗传操作研究

目的建立新磷氮霉素A产生菌金黄色链霉菌AGR0001（Streptomycesauratus AGR0001）的遗传操作体系，为阐明其生物合成的调控和后修饰机制，并通过遗传改造提高其产量和获得更多的新化合物奠定基础，同时可为其它链霉菌的遗传操作研究提供新的参考。方法筛选了SauratusAGR0001生长、产孢的最佳培养基，检测了其对11种不同抗生素的敏感性，探索了将外源DNA导入该菌的最适方法。结果ISP4和MS培养基分别是S. auratus AGR0001的最佳产孢和生长培养基；该菌对壮观霉素等7种抗生素敏感，对氨苄和羧苄西林具有抗性，对萘啶酮酸和阿伯拉霉素在低浓度有抗性，而在高浓度敏感；使用PEG介导的原生质体转化、电转菌丝体、接合转移等方法均能将外源DNA导入sauratusAGR0001中。利用接合转移将携带透明颤菌血红蛋白基因vhb（Vitreoscillahemoglobin）的自杀型质粒pSETl52导入S. auratus AGR0001中并整合至其染色体上进行表达，提高了发酵液的抗真菌活性。结论建立了S. auratus AGR0001的遗传操作体系。