大肠杆菌CFT073中Curli系统重要基因 csgF 的克隆、表达、纯化和结构分析

目的 对大肠杆菌CFT073中Culri系统的重要蛋白CsgF进行高效表达，探索其纯化条件和三维结构，为研究Curli生物合成机制提供理论基础。 方法 以大肠杆菌CFT073基因组为模板扩增 csgF 基因，构建pET28a-csgF(nsp)-N-6His、pET28a-csgF(20−129)-N-6His、pET28a-csgF-C-6His和pET28a-csgF(nsp)-C-6His等重组质粒，转化到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)中诱导表达；通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定CsgF蛋白在大肠杆菌中的表达情况，用Ni-NTA His Bind Resin和凝胶排阻层析色谱纯化重组蛋白CsgF，SDS-PAGE和Western blotting 方法鉴定分析；用Pull down实验研究CsgF与CsgG蛋白的相互作用，同源模建方法分析重组蛋白CsgF的三级结构。 结果 克隆了目的基因 csgF ，并筛选出稳定CsgF蛋白的条件：50 mmol/L sodium acetate (pH 5.0)、150 mmol/L NaCl、5% Glyercol；CsgF与CsgG存在相互作用，CsgF三维结构模型显示为(β/α)。 结论 获得了高纯度稳定的CsgF重组蛋白及其三维结构，为进一步研究CsgF结构与功能奠定了基础。